本文關(guān)鍵詞： 日本三角渦蟲(chóng) Spsb基因 再生 表達(dá)分析　出處：《河南師范大學(xué)》2016年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：SPSB蛋白家族由四個(gè)高度保守的成員(SPSB1-SPSB4)組成,共同特征是其氨基酸包含SPRY結(jié)構(gòu)域和羧基(C)端的SOCS-box基序。雖然在高等動(dòng)物和一些無(wú)脊椎動(dòng)物中已克隆了Spsb基因并對(duì)其表達(dá)模式進(jìn)行了分析,但是,到目前為止,這些基因確切的功能尚不清楚。本研究以日本三角渦蟲(chóng)(Dugesia japonica)為實(shí)驗(yàn)材料,克隆了DjSpsb基因的全長(zhǎng)cDNA序列并對(duì)其表達(dá)模式進(jìn)行了系統(tǒng)分析,結(jié)果如下:1、利用RACE技術(shù)首次在日本三角渦蟲(chóng)中克隆了Spsb基因的全長(zhǎng)c DNA序列。DjSpsb基因的cDNA全長(zhǎng)為1251 bp,包含一個(gè)105 bp的5′端非翻譯區(qū)(5′UTR)和一個(gè)87 bp的3′端非翻譯區(qū)(3′UTR)。其中3′端非翻譯區(qū)包含一個(gè)poly(A)尾和一個(gè)終止密碼子。最大開(kāi)放閱讀框(ORF)為1059 bp,編碼一個(gè)由352個(gè)氨基酸殘基組成的蛋白質(zhì)。2、利用ExPASy,TMHMM 2.0、SMART、Inter Pro等其他在線軟件對(duì)該基因所推導(dǎo)的氨基酸序列進(jìn)行生物信息學(xué)分析,結(jié)果表明:DjSPSB蛋白的分子量為40.90 k Da,理論等電點(diǎn)為9.04,含有一個(gè)保守的SPRY結(jié)構(gòu)域和一個(gè)SOCS盒,為親水性核蛋白,存在多個(gè)磷酸化位點(diǎn),無(wú)信號(hào)肽且不存在跨膜區(qū)。3、根據(jù)該基因所推導(dǎo)的氨基酸序列利用用貝葉斯MrBayes 3.1.2構(gòu)建了系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)。系統(tǒng)進(jìn)化分析表明DjSpsb在多細(xì)胞動(dòng)物進(jìn)化過(guò)程中高度保守,且與Spsb1,Spsb2和Spsb4有較高的同源性。4、利用整體原位雜交、切片原位雜交和實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)研究了DjSpsb基因在整體及再生渦蟲(chóng)中的時(shí)空表達(dá)模式。結(jié)果表明:在性未成熟的整體渦蟲(chóng)中,DjSpsb主要在頭部表達(dá)且邊緣部位陽(yáng)性信號(hào)較強(qiáng),此外,DjSpsb在神經(jīng)組織和腸支表達(dá);在性成熟的個(gè)體中,陽(yáng)性信號(hào)主要在頭部、睪丸和卵黃腺部位表達(dá),卵巢部位不表達(dá);在再生個(gè)體中,陽(yáng)性信號(hào)在再生胚基表達(dá)。RT-PCR結(jié)果顯示,在尾再生頭部分,DjSpsb基因在切割后1,3和5天上調(diào)表達(dá)且在第5天達(dá)到峰值,切割后第7天其表達(dá)水平下降且與對(duì)照表達(dá)水平相似。5、應(yīng)激反應(yīng)實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:熱應(yīng)激和乙醇培養(yǎng)誘導(dǎo)Djspsb基因高表達(dá)且在乙醇誘導(dǎo)下呈劑量效應(yīng),而高劑量的離子液體抑制其表達(dá)。研究結(jié)果提示:Djspsb基因可能在渦蟲(chóng)再生過(guò)程特別是中樞神經(jīng)系統(tǒng)形成功能恢復(fù)過(guò)程中起著重要作用,另外,該基因可能是一個(gè)多功能基因,在渦蟲(chóng)生殖系統(tǒng)的發(fā)育和應(yīng)激保護(hù)過(guò)程中發(fā)揮作用。
[Abstract]:The SPSB protein family consists of four highly conserved members, SPSB1-SPSB4. The common feature is that its amino acids contain the SOCS-box motif at the end of SPRY domain and carboxyl motif. Although the Spsb gene has been cloned and analyzed in higher animals and some invertebrates, so far, The exact function of these genes is unclear. In this study, the full-length cDNA sequence of DjSpsb gene was cloned from Dugesia japonica, and its expression pattern was systematically analyzed. The results were as follows: 1: 1. The full-length cDNA sequence of Spsb gene and the cDNA length of Spsb gene were firstly cloned by using RACE technique. The cDNA length of the Spsb gene was 1251 BP, including a 105bp 5'untranslated region (5'UTRR) and an 87bp 3'terminal untranslated region (Utria). The 3'untranslated region contains a polymorphic A) tail and a termination codon. The maximum open reading frame (ORF) is 1059 BP, encoding a protein of 352 amino acid residues. ExPASy-TMHMM 2.0 SMARTInter Pro and other online software were used to detect the gene. The deduced amino acid sequence was analyzed by bioinformatics. The results showed that the molecular weight of the protein was 40.90 kDa, and the theoretical isoelectric point was 9.04. The protein contained a conserved SPRY domain and a SOCS box, which was a hydrophilic nucleoprotein with multiple phosphorylation sites. A phylogenetic tree was constructed by using Bayesian MrBayes 3.1.2 according to the deduced amino acid sequence of the gene. Phylogenetic analysis showed that DjSpsb was highly conserved in the evolution of multicellular animals. It has high homology with Spsb1, SPsb2 and Spsb4. In situ hybridization and real-time fluorescence quantitative PCR techniques were used to study the temporal and spatial expression patterns of DjSpsb gene in the whole and regenerated planaria. The results showed that the expression of DjSpsb gene was mainly in the head and the positive signal was strong at the edge of the whole parasite. In addition, DjSpsb was expressed in nerve tissues and intestinal branches; in sexually mature individuals, the positive signals were mainly expressed in the head, testis and yolk glands, but not in the ovary; in regenerated individuals, the positive signals were expressed in regenerated embryos. The expression of DjSpsb gene was up-regulated on the 3rd and 5th day after cleavage, and reached its peak on the 5th day. On the 7th day after cutting, the expression level of Djspsb decreased and was similar to that of the control. The results of stress reaction showed that heat stress and ethanol culture induced the high expression of Djspsb gene in a dose-dependent manner. The high dose of ionic liquid inhibits its expression. The results suggest that the Djspsb gene may play an important role in the regeneration process, especially in the recovery of central nervous system formation, and it may be a multifunctional gene. Play a role in the development of the reproductive system and stress protection.
【學(xué)位授予單位】：河南師范大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：Q78

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 費(fèi)利娜;馬克學(xué);陳廣文;石苛;劉德增;;日本三角渦蟲(chóng)染色體和分子分類特征研究[J];河南師范大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版);2009年02期

2 武麗敏;陳廣文;劉德增;;河南省桐柏縣兩產(chǎn)地日本三角渦蟲(chóng)核型分析[J];動(dòng)物學(xué)雜志;2010年03期

3 宋林霞;徐振彪;;紫外線對(duì)日本三角渦蟲(chóng)切割損傷前后超氧化物歧化酶活性的影響[J];安徽農(nóng)業(yè)科學(xué);2010年21期

4 薛德明;李鵬聲;陳廣文;傅山崗;孫曉娟;;日本三角渦蟲(chóng)腸上皮的超微結(jié)構(gòu)[J];河南師范大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版);2011年03期

5 葉海燕;侯曉薇;黃原;;日本三角渦蟲(chóng)單克隆群體的繁殖技術(shù)[J];實(shí)驗(yàn)動(dòng)物科學(xué);2011年03期

6 薛德明;陳廣文;范念斯;李鵬聲;石長(zhǎng)應(yīng);孫曉娟;;日本三角渦蟲(chóng)神經(jīng)系統(tǒng)的組織學(xué)觀察[J];四川動(dòng)物;2011年05期

7 陳廣文;程方方;王清華;董自梅;劉德增;;溫度對(duì)日本三角渦蟲(chóng)眼點(diǎn)再生速度的影響[J];河南師范大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版);2012年06期

8 劉昌利;席貽龍;黃林;王進(jìn);;草甘膦、乙草胺對(duì)日本三角渦蟲(chóng)攝食與再生的影響[J];應(yīng)用生態(tài)學(xué)報(bào);2008年11期

9 陳廣文;董自梅;田士瑞;王清華;劉濤;劉德增;;河北3產(chǎn)地日本三角渦蟲(chóng)的染色體變異與核型多樣性分析[J];動(dòng)物學(xué)雜志;2010年06期

10 和振武;許人和;;河南省渦蟲(chóng)的首次記錄[J];河南師范大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版);1989年03期

相關(guān)重要報(bào)紙文章 前1條

1 記者 劉啟達(dá)　實(shí)習(xí)生 裴錦文;渦蟲(chóng)可用于改善環(huán)境[N];深圳特區(qū)報(bào);2013年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前4條

1 石長(zhǎng)應(yīng);離子液體溴化1-辛基-3-甲基咪唑（[C_8mim]Br]）對(duì)日本三角渦蟲(chóng)的毒性作用研究[D];河南師范大學(xué);2015年

2 葉海燕;日本三角渦蟲(chóng)（Dugesia japonica）線粒體蛋白質(zhì)組、轉(zhuǎn)錄組研究[D];陜西師范大學(xué);2012年

3 董自梅;渦蟲(chóng)頭部再生過(guò)程中眼點(diǎn)形態(tài)發(fā)生及相關(guān)基因的表達(dá)分析[D];河南師范大學(xué);2011年

4 馬克學(xué);持久饑餓對(duì)日本三角渦蟲(chóng)細(xì)胞形態(tài)結(jié)構(gòu)、生化代謝和基因表達(dá)的影響[D];河南師范大學(xué);2014年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 豆賀;日本三角渦蟲(chóng)Runt-1、Runt-2和hnRNPA2B1基因的克隆及其表達(dá)分析[D];河南師范大學(xué);2015年

2 陳靜;日本三角渦蟲(chóng)Spsb基因的克隆及表達(dá)分析[D];河南師范大學(xué);2016年

3 孫麗群;離子液體對(duì)日本三角渦蟲(chóng)的毒性作用研究[D];河南師范大學(xué);2012年

4 彭瑩;日本三角渦蟲(chóng)（Dugesia japonica）鉛脅迫的比較線粒體蛋白質(zhì)組研究[D];陜西師范大學(xué);2012年

5 郭慧;恒定磁場(chǎng)對(duì)大乳頭水螅及日本三角渦蟲(chóng)生物學(xué)效應(yīng)的初步研究[D];安徽師范大學(xué);2010年

6 王凡;四種不同烴鏈長(zhǎng)度咪唑類離子液體對(duì)日本三角渦蟲(chóng)的毒性作用研究[D];河南師范大學(xué);2014年

7 孫璐;日本三角渦蟲(chóng)Djwnt1基因的克隆及再生過(guò)程中的表達(dá)分析[D];山東師范大學(xué);2012年

8 馮程程;日本三角渦蟲(chóng)flotillins基因的克隆及功能分析[D];河南師范大學(xué);2014年

9 孫健;云南、河南兩省日本三角渦蟲(chóng)基于mtDNA COI基因片段的分子系統(tǒng)學(xué)研究[D];河南師范大學(xué);2010年

10 王清華;淡水渦蟲(chóng)眼點(diǎn)再生及Djnos基因?qū)ρ埸c(diǎn)再生相關(guān)性研究[D];河南師范大學(xué);2011年

，

本文編號(hào)：1517184