天堂国产午夜亚洲专区-少妇人妻综合久久蜜臀-国产成人户外露出视频在线-国产91传媒一区二区三区

當(dāng)前位置:主頁 > 科技論文 > 基因論文 >

七種免疫增強劑及其復(fù)方對豬圓環(huán)病毒2型基因工程疫苗的免疫增強作用研究

發(fā)布時間:2018-02-10 13:12

  本文關(guān)鍵詞: PCV2 免疫增強劑 基因工程苗 角鯊?fù)?PoIFN-γ 出處:《揚州大學(xué)》2017年碩士論文 論文類型:學(xué)位論文


【摘要】:豬圓環(huán)病毒2型(Porcinecircovirus2,PCV2)是一種豬群易感染的常見病原體,與多種豬群傳染性疾病的爆發(fā)流行有關(guān)。最為常見的疾病是斷奶仔豬多系統(tǒng)衰竭綜合征(PMWS),為有效控制及消滅PCV2的爆發(fā)流行,各國學(xué)者均致力于PCV2有效疫苗的研發(fā)。PCV2 Cap蛋白是目前研發(fā)PCV2基因工程疫苗的首選靶抗原。另有研究表明,免疫增強劑是一類免疫促進劑及免疫刺激劑,主要功能是增強機體的抗腫瘤、抗感染、糾正免疫缺陷能;免疫增強劑具有激活體內(nèi)多種免疫活性細(xì)胞,增強機體特異性及非特異性免疫功能,還能發(fā)揮佐劑作用,強化與之配合使用的抗原免疫原性,從而加速誘導(dǎo)免疫應(yīng)答反應(yīng)。目前免疫增強劑種類很多。本研究對七種免疫增強劑進行篩選,包括黃芪多糖、人參莖葉總皂苷、鹽酸左旋咪唑、角鯊?fù)、Poly(I:C),Po-IFN-y蛋白和Po-GM-CSF蛋白,目的是篩選對本實驗室制備的PCV2-Cap蛋白疫苗有最佳增強效果的免疫增強劑。1.黃芪多糖、人參莖葉總皂苷、鹽酸左旋咪唑、角鯊?fù)、Poly(I:C)對PCV2基因工程疫苗的免疫增強研究為探究免疫增強劑對PCV2基因工程疫苗的免疫增強作用,本研究制備了黃芪多糖、人參莖葉總皂苷、鹽酸左旋咪唑、角鯊?fù)椤oly(I:C)等5種免疫增強劑+PCV2Cap疫苗。制備方法均按PCV2-Cap蛋白:Gel 01佐劑:免疫增強劑體積比為75:20:5來配置疫苗。采用腹腔注射方式免疫小鼠。21 d后進行攻毒試驗,以鑒定5種免疫增強劑的免疫保護效力。采用間接ELISA方法測定免疫21 d血清PCV2特異性IgG抗體水平,結(jié)果表明,Poly(I:C)與角鯊?fù)閮煞N增強劑能誘導(dǎo)疫苗產(chǎn)生更高水平的PCV2特異性IgG抗體,顯著提高PCV2疫苗的免疫原性。CUSABIO試劑盒檢測鼠免疫后21 d小鼠淋巴細(xì)胞經(jīng)Con A刺激后上清當(dāng)中IL-4、IL-6、IFN-γ細(xì)胞因子濃度,結(jié)果表明:角鯊?fù)槟茱@著促進PCV2Cap疫苗誘導(dǎo)小鼠分泌IL-6和IFN-γ。Poly(I:C)僅有輕微促進作用。PCV2攻毒后21 d,采用熒光定量PCR檢測PCV2病毒血癥及脾臟的PCV2載量,結(jié)果表明:角鯊?fù)槟茌o助PCV2-Cap疫苗減輕攻毒后PCV2的病毒血癥及降低脾臟病毒攜帶水平。因此,角鯊?fù)榕cPCV2-Cap蛋白混合免疫能顯著增強PCV2-Cap疫苗的免疫保護作用;Ploy(I:C)雖然也能提高該疫苗的細(xì)胞免疫水平,但對病毒血癥及脾臟病毒攜帶量的控制不如角鯊?fù)樽饔妹黠@。2.黃芪多糖、人參莖葉總皂苷、鹽酸左旋咪唑、角鯊?fù)、Poly(I:C)組成的復(fù)方對PCV2基因工程疫苗的免疫增強研究為探究復(fù)方免疫增強劑對PCV2-Cap蛋白疫苗的免疫增強作用,本研究根據(jù)免疫增強機制和搭配禁忌,從黃芪多糖、人參莖葉總皂苷、鹽酸左旋咪唑、角鯊?fù)、Poly(I:C)5種免疫增強劑中挑選2到4種組合成6組復(fù)方,構(gòu)成復(fù)方免疫增強劑+PCV2 Cap疫苗。制備方法均按PCV2-Cap疫苗:Gel 01佐劑:免疫增強劑體積比為75:20:5來配置疫苗。采用腹腔注射方式免疫小鼠。21 d后進行攻毒試驗,以鑒定6種復(fù)方免疫增強劑的免疫保護效果。采用間接ELISA方法測定免疫21 d血清PCV2特異性IgG抗體水平。CUSABIO試劑盒檢測鼠免疫后21 d小鼠血清當(dāng)中IL-4、IL-6、IFN-γ細(xì)胞因子濃度。PCV2攻毒后21天,采用熒光定量PCR檢測PCV2病毒血癥。綜合結(jié)果表明:黃芪多糖+鹽酸左旋咪唑+Poly(I:C);黃芪多糖+鹽酸左旋咪唑+角鯊?fù)?Poly(I:C);黃芪多糖+Poly(I:C)三組復(fù)方增強劑能輔助PCV2-Cap疫苗減輕攻毒后PCV2病毒血癥。因此,這三組復(fù)方免疫增強劑和PCV2-Cap蛋白混合免疫能顯著增強PCV2-Cap疫苗的免疫保護作用,三組中,黃芪多糖+Poly(I:C)組免疫增強效果最佳;其余三組復(fù)方疫苗雖然也能提高體液或者細(xì)胞免疫水平,但對病毒血癥的緩解不如這三組作用明顯。3.豬IFN-y與豬GM-CSF的表達(dá)和純化通過PCR進行目的基因擴增、雙酶切、與載體連接、轉(zhuǎn)化、鑒定,制備PoIFN-γ-pCold I-Fh8和PoGM-CSF-pCold I-Fh8重組菌液;最終進一步對重組菌進行誘導(dǎo)蛋白表達(dá),并且優(yōu)化IPTG誘導(dǎo)濃度、時間,提高蛋白表達(dá)效率;最終,豬IFN-γ以包涵體形式表達(dá),而豬GM-CSF大部分以可溶性形式表達(dá)。最后,采用GE蛋白純化柱對蛋白進行純化,獲得濃度分別為1.6 mg/ml和2.6 mg/ml的豬IFN-y、豬GM-CSF兩種細(xì)胞因子類重組蛋白。為進一步研究豬IFN-γ、GM-CSF兩種細(xì)胞因子類蛋白對PCV2-Cap蛋白疫苗的免疫增強作用提供基礎(chǔ)。4.豬IFN-]與豬GM-CSF對PCV2-Cap基因工程疫苗的免疫增強作用研究為探究PoIFN-γ、PoGM-CSF兩種重組蛋白對PCV2-Cap蛋白疫苗的免疫增強作用,將研制的2種重組蛋白與PCV2 Cap蛋白疫苗混合,分別免疫小鼠,21 d后進行攻毒試驗。采用間接ELISA方法測定免疫21 d血清PCV2特異性Ig G抗體水平,結(jié)果表明,PoIFN--γ重組蛋白能顯著提高PCV2-Cap疫苗免疫產(chǎn)生的血清特異性IgG抗體水平(p0.05);PoGM-CSF重組蛋白未觀察到此類增強效果(p0.05)。采用SYBR熒光定量PCR法檢測鼠免疫后21 d脾臟淋巴細(xì)胞IL-4、IL-6、IFN-γ細(xì)胞因子基因mRNA表達(dá)水平,結(jié)果表明,PoIFN-γ重組蛋白能顯著提高疫苗免疫后脾臟細(xì)胞IL-4、IFN-γ的m RNA表達(dá)水平。PCV2攻毒后21d,采用實時熒光定量PCR檢測PCV2病毒血癥及脾臟PCV2病毒載量,結(jié)果表明,PoIFN-γ重組蛋白能顯著減輕攻毒后PCV2病毒血癥,對PCV2病毒有明顯抑制作用,并且能有效降低脾臟PCV2病毒載量。因此,PoIFN-y重組蛋白能顯著增強PCV2-Cap疫苗的免疫保護作用,本研究為進一步測定其在豬體上的免疫增強作用奠定了基礎(chǔ)。
[Abstract]:A new type of vaccine against PCV2 - Cap protein has been prepared by immunizing mice by intraperitoneal injection . Its main function is to enhance the anti - tumor , anti - infection and anti - immune deficiency of PCV2 . The immune enhancement of PCV2 - Cap vaccine was studied by means of indirect ELISA . The recombinant protein of porcine IFN - 緯 and GM - CSF could be used to enhance the immune function of PCV2 - Cap protein vaccine . The results showed that the recombinant protein of PoIFN - 緯 could significantly improve the expression level of IL - 4 and IFN - 緯 in spleen cells after vaccination .

【學(xué)位授予單位】:揚州大學(xué)
【學(xué)位級別】:碩士
【學(xué)位授予年份】:2017
【分類號】:S859.7

【相似文獻】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 雷連成,韓文瑜;免疫增強劑的研究進展[J];中國獸藥雜志;2002年06期

2 吳永明,孫文梅,曹向英,王永康,錢應(yīng)娟,王權(quán);畜禽免疫增強劑的開發(fā)應(yīng)用[J];上海畜牧獸醫(yī)通訊;2003年05期

3 ;免疫增強劑研究進展[J];北方牧業(yè);2007年03期

4 方炳虎;楊利軍;陳建新;張魁華;;中藥免疫增強劑[J];動物醫(yī)學(xué)進展;2007年08期

5 王世澤;;幾種常用的動物免疫增強劑[J];養(yǎng)殖技術(shù)顧問;2010年06期

6 孫躍;王作友;趙立新;;動物用免疫增強劑[J];吉林畜牧獸醫(yī);2012年02期

7 張顯升;段躍進;;國內(nèi)外免疫增強劑研究進展[J];中國獸藥雜志;1989年02期

8 張顯升,蒲萬霞,但秉成,宋秉生,楊翠琴,楊玉英,嚴(yán)作庭;復(fù)合免疫增強劑對幼畜腹瀉的預(yù)防作用及其機理的研究[J];中國獸醫(yī)科技;1995年07期

9 喬彥良;;動物免疫增強劑的研究與應(yīng)用[J];中國動物保健;1999年06期

10 ;免疫增強劑——三萜糖苷[J];湖南畜牧獸醫(yī);2000年05期

相關(guān)會議論文 前10條

1 黃文華;;中藥免疫增強劑研究進展[A];紀(jì)念中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會中獸醫(yī)學(xué)分會成立30周年中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會中獸醫(yī)學(xué)分會2009年學(xué)術(shù)年會、華東區(qū)第十九次中獸醫(yī)科研協(xié)作與學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2009年

2 閆若潛;謝彩華;吳志明;李桂喜;張志凌;張健;劉梅芬;;雞基因工程免疫增強劑對不同種類疫苗免疫增強效果研究[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會2009學(xué)術(shù)年會論文集(下冊)[C];2009年

3 程安春;汪銘書;周毅;朱德康;黃誠;孟瓊?cè)A;宋勇;;動物免疫增強劑的研究進展[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會動物微生態(tài)學(xué)分會第三屆第六次學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2002年

4 金擴世;夏志平;金寧一;;免疫增強劑提高疫苗抗體水平試驗[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會家畜傳染病學(xué)分會成立20周年慶典暨第十次學(xué)術(shù)研討會論文集(下)[C];2003年

5 秦愛建;劉紅梅;許小琴;;免疫增強劑對雞傳染性法氏囊病基因免疫的增強作用[A];2005全國第二屆核酸疫苗研討會論文集[C];2005年

6 肖華麗;侯永清;丁斌鷹;朱惠玲;劉玉蘭;;復(fù)合免疫增強劑對脂多糖刺激斷奶仔豬血液免疫指標(biāo)、激素及炎性細(xì)胞因子水平的影響[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會動物營養(yǎng)學(xué)分會第十次學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2008年

7 閆若潛;謝彩華;吳志明;李桂喜;張志凌;張健;劉梅芬;;雞基因工程免疫增強劑對不同種類疫苗免疫增強作用研究[A];禽類新發(fā)傳染病高層論壇論文集[C];2009年

8 閆若潛;謝彩華;吳志明;李桂喜;張志凌;張健;劉梅芬;;雞基因工程免疫增強劑對不同種類疫苗免疫增強作用研究[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會小動物醫(yī)學(xué)分會第四次學(xué)術(shù)研討會、中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會獸醫(yī)外科學(xué)分會第十六次學(xué)術(shù)研討會論文集(2)[C];2009年

9 閆若潛;謝彩華;吳志明;李桂喜;張志凌;張健;劉梅芬;;雞基因工程免疫增強劑對不同種類疫苗免疫增強作用研究[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會家畜傳染病學(xué)分會第七屆全國會員代表大會暨第十三次學(xué)術(shù)研討會論文集(下冊)[C];2009年

10 肖華麗;侯永清;丁斌鷹;劉玉蘭;朱惠玲;;復(fù)合免疫增強劑對斷奶仔豬生長性能、免疫功能及機體抗氧化功能的影響[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會動物營養(yǎng)學(xué)分會第十次學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2008年

相關(guān)重要報紙文章 前10條

1 北京獸藥研究所副研究員 支海兵;免疫增強劑(全文完)[N];中國畜牧水產(chǎn)報;2000年

2 中國農(nóng)科院畜牧研究所 佟建明博士;不要盲目使用免疫增強劑[N];中國畜牧報;2002年

3 才典;國內(nèi)養(yǎng)殖免疫增強劑魚龍混雜利潤不菲[N];中國漁業(yè)報;2011年

4 上海復(fù)旦大學(xué)附屬華山醫(yī)院 李中東 (副主任藥師);免疫增強劑可以用嗎[N];家庭醫(yī)生報;2009年

5 義文化;普通人需要使用免疫增強劑嗎?[N];中國勞動保障報;2003年

6 王蔚佳;對抗非典,不可濫用免疫增強劑[N];中國消費者報;2003年

7 林甘;使用豬用高效免疫增強劑應(yīng)注意的問題[N];山東科技報;2001年

8 劉生;常用于家禽的免疫增強劑[N];河南科技報;2008年

9 董怡;免疫增強劑遠(yuǎn)期效果令人憂[N];大眾衛(wèi)生報;2003年

10 本報記者 王軍;免疫增強劑并非萬能[N];醫(yī)藥經(jīng)濟報;2003年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前6條

1 范云鵬;中藥黃酮復(fù)方免疫增強劑EPI及其作用機理研究[D];南京農(nóng)業(yè)大學(xué);2012年

2 陳興穎;中藥多糖免疫增強劑芪藿飲及作用機理研究[D];南京農(nóng)業(yè)大學(xué);2014年

3 劉翠艷;獸醫(yī)中藥免疫增強劑的篩選試驗及其藥理學(xué)研究[D];山東農(nóng)業(yè)大學(xué);2007年

4 王新霞;對蝦免疫增強劑的研究與應(yīng)用[D];中國海洋大學(xué);2004年

5 周鐵忠;遼寧省豬繁殖與呼吸綜合征分子流行病學(xué)調(diào)查及免疫防制研究[D];吉林大學(xué);2010年

6 白楠;改性酵母葡聚糖的制備及其作為免疫增強劑在兩種甲殼動物上的應(yīng)用[D];中國海洋大學(xué);2013年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 李海平;大黃魚免疫增強劑的篩選及應(yīng)用效果分析[D];集美大學(xué);2012年

2 陳華良;一種動物復(fù)合免疫增強劑的研制[D];華南農(nóng)業(yè)大學(xué);2016年

3 李建建;中藥免疫增強劑霍貞散的藥效學(xué)和安全性試驗研究[D];湖南農(nóng)業(yè)大學(xué);2016年

4 耿田田;雞超微粉中藥免疫增強劑的研究[D];河北科技師范學(xué)院;2016年

5 肖華麗;復(fù)合免疫增強劑組方的篩選及其抗免疫應(yīng)激作用的研究[D];武漢工業(yè)學(xué)院;2008年

6 廉宜君;G-中藥復(fù)方免疫增強劑中多糖的分離純化與免疫活性研究[D];石河子大學(xué);2007年

7 葉倩倩;某醫(yī)院免疫增強劑的應(yīng)用現(xiàn)狀及合理性評價[D];中南大學(xué);2013年

8 趙迎虎;復(fù)方中藥免疫增強劑“增康靈”對動物免疫功能的影響[D];湖南農(nóng)業(yè)大學(xué);2010年

9 譚雷濤;動物源性免疫增強劑的開發(fā)及其使用效果檢測的研究[D];山東農(nóng)業(yè)大學(xué);2006年

10 李雷斌;免疫增強劑α-甘露聚糖肽飼喂仔豬的效果研究與應(yīng)用[D];浙江大學(xué);2006年



本文編號:1500593

資料下載
論文發(fā)表

本文鏈接:http://www.sikaile.net/kejilunwen/jiyingongcheng/1500593.html


Copyright(c)文論論文網(wǎng)All Rights Reserved | 網(wǎng)站地圖 |

版權(quán)申明:資料由用戶12ae3***提供,本站僅收錄摘要或目錄,作者需要刪除請E-mail郵箱bigeng88@qq.com