本文關(guān)鍵詞： 馬立克病毒(MDV) SC- 商品化疫苗 PCR擴(kuò)增 斑點(diǎn)雜交　出處：《病毒學(xué)報(bào)》2017年04期 　論文類(lèi)型：期刊論文

【摘要】：為了對(duì)馬立克病毒(MDV)meq基因缺失疫苗株SC9-1與商品化MD疫苗CVI988/Rispens株、814株和HVT FC-126株進(jìn)行分子鑒別,本研究根據(jù)疫苗株SC9-1與其它MD疫苗株的基因組差異,分別針對(duì)I型MDVmeq基因以及SC9-1基因組中的禽網(wǎng)狀內(nèi)皮組織增殖癥病毒-長(zhǎng)末端重復(fù)序列(REV-LTR)插入片段,設(shè)計(jì)三對(duì)PCR擴(kuò)增引物,同時(shí)合成針對(duì)meq基因和REV-LTR片段的地高辛標(biāo)記探針,通過(guò)PCR擴(kuò)增和斑點(diǎn)雜交方法區(qū)分SC9-1株與其他疫苗株。結(jié)果表明,使用針對(duì)meq基因的引物F1/R1進(jìn)行PCR擴(kuò)增,SC9-1株、CVI988/Rispens株、814株分別擴(kuò)增出184bp、1 297bp、1 297bp目的片段,HVT FC-126株沒(méi)有條帶;使用針對(duì)meq基因的引物F2/R2進(jìn)行PCR擴(kuò)增,CVI988/Rispens株、814株均擴(kuò)增出746bp目的片段,SC9-1株、HVT FC-126株均沒(méi)有條帶;使用針對(duì)REV-LTR片段設(shè)計(jì)的引物F3/R3進(jìn)行PCR擴(kuò)增,SC9-1株擴(kuò)增出512bp目的片段,CVI988/Rispens株、814株、HVT FC-126株均沒(méi)有條帶。同時(shí),使用針對(duì)meq基因的探針進(jìn)行斑點(diǎn)雜交,CVI988/Rispens株、814株均顯示陽(yáng)性結(jié)果,SC9-1株、HVT FC-126株均為陰性;使用針對(duì)REV-LTR的探針進(jìn)行斑點(diǎn)雜交,SC9-1株顯示陽(yáng)性結(jié)果,CVI988/Rispens株、814株、HVT FC-126株均為陰性。因此,利用本研究設(shè)計(jì)的特異性PCR引物以及探針,通過(guò)PCR擴(kuò)增和斑點(diǎn)雜交方法可有效區(qū)分SC9-1與其他商品化MD疫苗。
[Abstract]:In order to detect the MDV meq gene deletion vaccine strain (SC9-1) and the commercial MD vaccine strain (CVI988/Rispens) of Marek virus. 814 strains and HVT FC-126 strains were identified by molecular analysis. In this study, the genomic differences between the vaccine strain SC9-1 and other MD vaccine strains were studied. The insertion fragments of type I MDVmeq gene and the long terminal repeat sequence of reticuloendothelial cell proliferation virus (reticuloendotheliavirus) in the SC9-1 genome were inserted respectively. Three pairs of PCR amplification primers were designed and digoxigenin labeled probes were synthesized for both meq gene and REV-LTR fragment. SC9-1 strain was distinguished from other vaccine strains by PCR amplification and dot blot hybridization. The results showed that the primers F1 / R1 for meq gene were used for PCR amplification of SC9-1 strain. 1844 CVI988/Rispens strains were amplified from 1849 BP 1 297 BP FC-126 strain, and there were no bands in the FC-126 strain. Using the primers F2 / R2 of meq gene to amplify the 746bp target fragment of SC9-1 strain by PCR amplification of CVI988% Rispens strain (814 strains). There were no bands in HVT FC-126 strains. Using the primers F3 / R3 designed for REV-LTR fragment, 512bp target fragment of CVI988 / Rispens strain was amplified by PCR amplification of SC9-1 strain. There were no bands in 814 meq FC-126 strains. Meanwhile, meq gene probes were used for dot blot hybridization of CVI988 / Rispens strain. All the 814 strains showed positive results. All the SC9-1 FC-126 strains were negative. Dot blot hybridization of SC9-1 strain against REV-LTR showed positive results of 814 CVI988 / Rispens strains. HVT FC-126 strains were all negative. Therefore, the specific PCR primers and probes designed in this study were used. PCR amplification and dot blot hybridization can effectively distinguish SC9-1 from other commercial MD vaccines.
【作者單位】： 山東農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院;
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金河南省聯(lián)合基金(項(xiàng)目號(hào):U1604232),題目:雞馬立克病病毒(MDV)遺傳、變異與致病的分子機(jī)制~~
【分類(lèi)號(hào)】：S852.4
【正文快照】： 馬立克病(Marek's disease,MD)是由馬立克病毒(Marek's disease virus,MDV)引起的一種雞的腫瘤性疾病,病毒可經(jīng)空氣、灰塵傳播,具有較強(qiáng)傳染力[1],給雞群帶來(lái)嚴(yán)重危害。MD疫苗由非致病性的III型MDV HVT FC-126株逐漸發(fā)展到傳代致弱的I型MDV CVI988/Rispens株[2,3],雖然國(guó)內(nèi)研

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本文編號(hào)：1453368