本文關鍵詞：利用CRISPR-Cas9系統(tǒng)定點突變豬MSTN基因的研究

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【摘要】：為了今后能夠有效的利用CRISPR-Cas9系統(tǒng)進行基因功能研究及轉基因動物的培育,本研究將帶有綠色熒光蛋白(GFP)和肌肉生長抑制素基因(Myostatin,MSTN)靶序列的CRISPR-Cas9系統(tǒng)轉染入PK15細胞系,利用流式細胞儀分離并收集轉染成功的陽性細胞,使用PCR擴增結合克隆測序的方法檢測和分析CRISPR-Cas9系統(tǒng)的定點突變情況,以評價CRISPR-Cas9系統(tǒng)的作用效果。結果發(fā)現(xiàn),隨機挑選的100個陽性克隆中,38個發(fā)生了變異,突變效率為38%,其中32個為插入突變,6個為缺失突變。插入突變中突變1(Mutation1)所占比例最高,為47.4%。本研究中CRISPR-Cas9系統(tǒng)的突變效率達到了38%,是目前進行基因組編輯的一個有效工具,推測其突變類型具有一定的偏好性。
【作者單位】： 黑龍江省農業(yè)科學院畜牧研究所;
【基金】：哈爾濱市科技局項目(2013RFQYJ037)
【分類號】：S828
【正文快照】： CRISPR-Cas9系統(tǒng)(Clustered regularly inter-spaced short palindromic repeats)是目前被廣泛關注的一種基因編輯系統(tǒng)。與鋅指核酸內切酶(Zincfinger endonuclease,ZFN)、類轉錄激活因子效應物核酸酶(Transcription activator-like effector nucle-ase,TALEN)等打靶技術相比,

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本文編號：1246030