本文關(guān)鍵詞：含人雌激素受體β基因啟動子熒光素酶報告基因載體的構(gòu)建及脂氧素對其轉(zhuǎn)錄活性的調(diào)節(jié)

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【摘要】：目的:構(gòu)建含人雌激素受體β(ERβ)基因啟動子的熒光素酶報告基因載體,并探究阿司匹林誘生的脂氧素(LXA_4)對其轉(zhuǎn)錄活性的影響。方法:以子宮內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞基因組DNA為模板,應(yīng)用PCR技術(shù)擴增ERβ啟動子序列,插入熒光素酶報告基因載體pGL3-basic中,構(gòu)建pGL3-basic-ERβ報告基因載體,行雙酶切及測序鑒定后將上述載體與pCMX-βgal載體共轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞24小時后,加入不同濃度(0.1、1、10、100 nmol/L)的LXA_4刺激24小時,然后裂解細(xì)胞檢測熒光素酶的活性。結(jié)果:測序結(jié)果表明,構(gòu)建的pGL3-basic-ERβ熒光素酶報告基因載體序列正確;在293T細(xì)胞中,構(gòu)建的pGL3-basic-ERβ報告基因載體與空載體pGL3-basic相比,pGL3-basic-ERβ報告基因載體的轉(zhuǎn)錄活性提高了將近十倍;熒光素酶報告系統(tǒng)表明,LXA4濃度為0.1、1、10、100 nmol/L時其相對熒光強度與對照組比較明顯升高(P0.05),10 nmol/L濃度的相對熒光強度明顯高于其他濃度(P0.05)。結(jié)論:成功構(gòu)建了pGL3-basic-ERβ熒光素酶報告基因載體,并證明在一定濃度LXA_4的刺激下ERβ啟動子區(qū)域轉(zhuǎn)錄活性升高,LXA_4濃度為10 nmol/L時轉(zhuǎn)錄活性達最高值。
【作者單位】： 廈門大學(xué)附屬第一醫(yī)院;廈門大學(xué)生命科學(xué)院細(xì)胞應(yīng)激生物學(xué)國家重點實驗室;
【基金】：國家自然科學(xué)基金面上項目(編號:81571418) 福建省衛(wèi)生系統(tǒng)中青年骨干人才培養(yǎng)基金(編號:2014-ZQN-ZD-31)
【分類號】：Q78
【正文快照】： 雌激素效應(yīng)的發(fā)揮均主要依賴雌激素受體(estro-gen receptor,ER),ER屬于核受體超家族中甾體受體中的一員,是受配體調(diào)節(jié)的轉(zhuǎn)錄因子,與其他的核受體具有相似的結(jié)構(gòu)。其有兩種亞型:雌激素受體α(ERα)和雌激素受體β(ERβ),它們是不同基因的產(chǎn)物,結(jié)構(gòu)和功能均不同。ERβ是第2種被

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本文編號：1225351