本文關(guān)鍵詞：人源抗狂犬病毒糖蛋白Ⅲ號(hào)表位鏈置換基因工程抗體研究

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【摘要】：為獲得針對(duì)狂犬病毒糖蛋白Ⅲ號(hào)表位的人源單抗,本研究采用噬菌體展示平臺(tái),對(duì)一株狂犬病毒糖蛋白Ⅲ號(hào)抗原表位的人源單抗CR4098采用鏈置換法進(jìn)行改造。以CR4098單鏈抗體為骨架,從狂犬疫苗接種者外周血分離淋巴細(xì)胞,提核酸逆轉(zhuǎn)錄,PCR擴(kuò)增抗體輕鏈可變區(qū)基因,替換CR4098的輕鏈基因,構(gòu)建輕鏈置換文庫(kù)。經(jīng)純化狂犬病毒aG株富集篩選,以上述篩選出的輕鏈陽(yáng)性克隆為骨架,構(gòu)建重鏈置換抗體庫(kù),富集篩選后通過(guò)ELISA和IFA鑒定陽(yáng)性抗體克隆并進(jìn)行序列測(cè)定。利用IgG表達(dá)載體VH/VK雙質(zhì)粒系統(tǒng)瞬時(shí)轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞實(shí)現(xiàn)IgG抗體的分泌型表達(dá),通過(guò)親和力測(cè)定和中和試驗(yàn)鑒定IgG抗體功能。結(jié)果顯示,通過(guò)輕鏈置換,我們獲得14株抗狂犬病毒scFv抗體,通過(guò)ELISA、IFA、親和力測(cè)定及中和試驗(yàn)確定人源抗體RV3A5特異性結(jié)合狂犬病毒糖蛋白,對(duì)狂犬病毒CVS株和aG株均具有良好的中和活性,親和力達(dá)到2.8×10-9 M。通過(guò)競(jìng)爭(zhēng)ELISA對(duì)抗體結(jié)合表位進(jìn)行鑒定,結(jié)果表明RV3A5特異性識(shí)別糖蛋白Ⅲ號(hào)抗原表位。通過(guò)鏈置換法成功獲得1株全新的針對(duì)狂犬病毒糖蛋白Ⅲ號(hào)表位的高親和力人源中和抗體,為狂犬病毒抗體制劑雞尾酒治療奠定了基礎(chǔ)。
【作者單位】： 中國(guó)疾病預(yù)防控制中心病毒病預(yù)防控制所衛(wèi)生部醫(yī)學(xué)病毒和病毒病重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;
【基金】：重大新藥創(chuàng)制“應(yīng)急抗體藥物研發(fā)技術(shù)平臺(tái)”(2013ZX09304103001006)
【分類號(hào)】：R373.9
【正文快照】： 狂犬病(Rabies)是由狂犬病毒(Rabies virus,RV)引起的急性傳染病[1],狂犬病毒基因組編碼5種主要蛋白(L、N、G、M1和M2),其中糖蛋白(G)是病毒與宿主細(xì)胞結(jié)合的配體,能誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生中和抗體,主要有I、II和III號(hào)中和性抗原位點(diǎn)[2]。根據(jù)世界衛(wèi)生組織(WHO)推薦的處理原則,III級(jí)暴

【相似文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：1202428