本文關(guān)鍵詞：利用微滴數(shù)字PCR方法快速分析轉(zhuǎn)基因玉米中外源基因的拷貝數(shù)

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【摘要】：以玉米自交系501幼胚為受體材料,首先將來自球形節(jié)桿菌的EPSPS基因(G23V)按玉米密碼子偏愛性進(jìn)行優(yōu)化與人工合成,并且將其克隆到表達(dá)載體pBAC9200中;然后利用農(nóng)桿菌介導(dǎo)法將質(zhì)粒載體轉(zhuǎn)入玉米自交系501的幼胚中。經(jīng)過愈傷誘導(dǎo)、草甘膦抗性篩選和分化培養(yǎng)最終獲得14株轉(zhuǎn)化再生植株。經(jīng)PCR、RT-PCR檢測表明,其中5株目的基因G23V-EPSPS穩(wěn)定整合且在轉(zhuǎn)錄水平獲得表達(dá)。隨后,利用微滴數(shù)字PCR技術(shù)對外源基因拷貝數(shù)進(jìn)行了檢測分析,分析結(jié)果表明在5株陽性轉(zhuǎn)基因植株中,外源基因G23V-EPSPS拷貝數(shù)分別為0.12、1.0、0.9、1.89和0.66,介于0~2之間。成功建立了草甘膦抗性基因G23V-EPSPS在玉米中的遺傳轉(zhuǎn)化體系,為以新型高抗草甘膦G23V-EPSPS基因作為轉(zhuǎn)基因玉米篩選標(biāo)記基因奠定了基礎(chǔ);而且以微滴數(shù)字PCR技術(shù)代替?zhèn)鹘y(tǒng)的Southern Blot簡便快速的完成外源基因拷貝數(shù)的分析,為微滴數(shù)字PCR技術(shù)在轉(zhuǎn)基因外源基因拷貝數(shù)檢測上的廣泛應(yīng)用做了初步的探索。
【作者單位】： 北京市農(nóng)林科學(xué)院北京農(nóng)業(yè)生物技術(shù)研究中心;首都師范大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院;
【基金】：國家轉(zhuǎn)基因生物新品種培育重大專項(xiàng)(2013ZX08003-001) 北京市農(nóng)林科學(xué)院創(chuàng)新團(tuán)隊(duì)(JNKST201617)資助
【分類號】：S513
【正文快照】： 玉米(Zea mays L.)是世界三大糧食作物之一,在農(nóng)業(yè)、畜牧業(yè)和工業(yè)中占據(jù)重要地位,全球?qū)τ衩椎男枨罅空诓粩嗯噬�。近年�?玉米作為轉(zhuǎn)基因技術(shù)主要的研究對象受到世界各國科學(xué)家的廣泛關(guān)注。應(yīng)用轉(zhuǎn)基因技術(shù)已獲得多個可用的農(nóng)藝性狀,如在玉米螟和食根害蟲的防治、除草劑的抗

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