本文關(guān)鍵詞：重組豬細小病毒VP2基因的豬偽狂犬病毒rPRV-VP2株的構(gòu)建及純化

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【摘要】：參考GenBank中登錄的豬細小病毒(PPV)(M38367.1)基因序列,設(shè)計1對可以擴增出約1.6kb PPV VP2基因片段的特異性引物,上、下游引物的5′端均引入BamHⅠ酶切位點,PCR擴增得到VP2目的片段后,連接到pMD18-T載體中得到重組質(zhì)粒pMD-VP2。取本實驗室構(gòu)建的含綠色熒光蛋白標記基因的偽狂犬病毒(PRV)通用轉(zhuǎn)移質(zhì)粒pG和構(gòu)建好的pMD-VP2質(zhì)粒,用BamHⅠ對質(zhì)粒pG和pMD-VP2進行酶切,然后用CIAP對酶切產(chǎn)物進行去磷酸化處理,純化回收后將VP2基因插入pG質(zhì)粒中獲得重組偽狂犬病毒轉(zhuǎn)移質(zhì)粒pGVP2。用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法將PRV HB-98株全基因組與質(zhì)粒pGVP2共轉(zhuǎn)染ST細胞,得到攜帶有PPV VP2外源抗原基因和綠色熒光蛋白標記基因的重組偽狂犬病毒rPRV-VP2株。結(jié)合VP2基因PCR擴增和綠色熒光觀察,經(jīng)5輪病毒空斑純化得到了純化的重組病毒rPRV-VP2株。
【作者單位】： 河南農(nóng)業(yè)大學(xué)鄭州市豬重大疾病防控重點實驗室;鄭州師范學(xué)院;
【關(guān)鍵詞】： PRV 豬細小病毒 VP基因 重組
【基金】：河南省重大科技專項資助項目(111100110300)
【分類號】：S852.65
【正文快照】： *Corresponding author,E-mail:chhy927@163.com豬細小病毒(porcine parvovirus,PPV)屬于細小病毒科、細小病毒屬成員[1],是引發(fā)豬繁殖障礙的重要病原體之一,該病原體主要引起母豬尤其是初產(chǎn)妊娠母豬發(fā)生流產(chǎn)、死胎和木乃伊胎、而母豬本身往往無明顯臨床癥狀。本病在世界范圍

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前5條

1 王林青;付朋飛;喬涵;郭曉慶;朱前磊;王淑娟;陳紅英;崔保安;;表達豬細小病毒VP2蛋白和豬IL-18重組偽狂犬病毒的構(gòu)建[J];中國獸醫(yī)學(xué)報;2015年09期

2 潘茲書,張楚瑜,陳玉棟,閔平;表達豬瘟病毒E2基因和gfp報道基因的偽狂犬病病毒雙基因轉(zhuǎn)移載體的構(gòu)建[J];武漢大學(xué)學(xué)報(理學(xué)版);2002年04期

3 呂建強,陳煥春,趙俊龍;豬細小病毒疫苗研究進展[J];動物醫(yī)學(xué)進展;2002年01期

4 郭萬柱,徐志文,王小玉,程陸,王印,汪銘書;新型偽狂犬病病毒基因缺失株的構(gòu)建及生物學(xué)特性研究(初報)[J];四川農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報;2000年01期

5 丁建華,付烈振,王家富,羅滿林,謝小虎,張楚瑜;偽狂犬病毒表達載體的構(gòu)建[J];武漢大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)版);1997年06期

【共引文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 付朋飛;喬涵;楊興武;張宇;王林青;郭曉慶;潘鑫龍;陳紅英;;重組豬細小病毒VP2基因的豬偽狂犬病毒rPRV-VP2株的構(gòu)建及純化[J];中國獸醫(yī)學(xué)報;2016年09期

2 李天芝;于新友;謝金文;沈志強;;豬細小病毒分子生物學(xué)診斷技術(shù)及基因工程疫苗的研究進展[J];養(yǎng)豬;2016年03期

3 付朋飛;潘鑫龍;喬涵;楊興武;朱前磊;郭曉慶;張宇;陳紅英;;表達豬細小病毒VP2蛋白的重組豬偽狂犬病毒在小鼠體內(nèi)的免疫反應(yīng)[J];病毒學(xué)報;2016年02期

4 趙宇;田荔;母曉宇;董井泉;高明春;張文龍;馬波;王君偉;;鴨腸炎病毒C-KCE株TK基因的原核表達及其多克隆抗體的制備[J];黑龍江畜牧獸醫(yī);2015年09期

5 智曉瑩;王凡;董金杰;陳苗苗;常艷燕;劉學(xué)榮;;豬偽狂犬病病毒TK基因的研究進展[J];青海畜牧獸醫(yī)雜志;2014年04期

6 胡艷芬;管萌;劉開春;陳素娟;彭大新;劉秀梵;;偽狂犬病病毒gN基因缺失株的構(gòu)建及其在小鼠上的免疫效力分析[J];畜牧獸醫(yī)學(xué)報;2014年01期

7 鄧曉輝;陳柳;葉偉成;李軍星;崔尚金;余斌;云濤;崔言順;孫元;仇華吉;張帥;張存;;共表達豬細小病毒VP2蛋白和豬圓環(huán)病毒2型Cap蛋白的重組偽狂犬病毒的構(gòu)建及其鑒定[J];中國預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報;2012年04期

8 傅元華;劉俊斌;錢鐘;李玉和;王紹君;;二乙烯亞胺對豬細小病毒的滅活作用[J];中國動物傳染病學(xué)報;2012年01期

9 董浩;吳博;張建瑩;胡桂學(xué);;豬偽狂犬病病毒疫苗株與野毒株鑒別PCR檢測方法的建立及初步應(yīng)用[J];中國畜牧獸醫(yī);2011年12期

10 陳楊;郭萬柱;陳弟詩;徐志文;朱玲;王印;王小玉;;豬細小病毒VP2蛋白病毒樣顆粒在偽狂犬病病毒表達系統(tǒng)中的表達[J];中國獸醫(yī)學(xué)報;2011年10期

【二級參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 鈔安軍;付朋飛;郭曉慶;高曉云;崔保安;陳紅英;;表達豬圓環(huán)病毒Ⅱ型ORF2基因的重組豬偽狂犬病病毒的免疫原性[J];微生物學(xué)報;2014年02期

2 吳宇陽;陳龍彪;崔保安;王林青;盧權(quán)威;鈔安軍;李坤;魏戰(zhàn)勇;陳紅英;;豬細小病毒河南地方株HP104的分離與生物學(xué)特性鑒定[J];中國獸醫(yī)學(xué)報;2013年10期

3 曹素芳;王巖;;豬IL-18在豬繁殖與呼吸綜合征滅活疫苗中的免疫佐劑作用[J];中國獸醫(yī)雜志;2013年08期

4 王子馨;李坤;劉金朋;崔保安;王淑娟;朱前磊;陳紅英;;PCV2 ORF2基因與豬IL-18基因共表達DNA疫苗的免疫原性[J];中國獸醫(yī)學(xué)報;2013年04期

5 張璇;張玉萍;郭智;;IL-18的研究進展[J];實用癌癥雜志;2012年05期

6 趙敏;張春杰;程相朝;李銀聚;吳庭才;楊濤;;重組雞IL-18對新城疫疫苗免疫增強作用的研究[J];江西農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報;2011年04期

7 謝巧;李春華;;豬細小病毒分子生物學(xué)診斷技術(shù)及基因工程疫苗的研究進展[J];畜牧與獸醫(yī);2010年02期

8 甄洪花;沈志強;單虎;王金良;付石軍;張松林;;豬細小病毒結(jié)構(gòu)蛋白VP2研究進展[J];動物醫(yī)學(xué)進展;2009年08期

9 鄭蘭蘭;崔保安;陳紅英;陳瑞亮;方忠意;李小康;趙麗;;豬白細胞介素18全基因的克隆、真核表達質(zhì)粒的構(gòu)建及其在豬腎細胞中的表達[J];中國獸醫(yī)學(xué)報;2009年01期

10 張銀梅,郭萬柱,汪銘書,顏其貴;偽狂犬病病毒Fa株gp63(gⅠ)基因轉(zhuǎn)移載體質(zhì)粒的構(gòu)建[J];畜牧獸醫(yī)學(xué)報;2001年04期

【相似文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 陳先進;豬細小病毒分子生物學(xué)研究進展[J];福建畜牧獸醫(yī);2002年05期

2 張宇;曹三杰;文心田;;豬細小病毒分子生物學(xué)研究進展[J];貴州畜牧獸醫(yī);2005年06期

3 吳淑芳;付瑞;邢瑞昌;賀爭鳴;;豬細小病毒血清學(xué)檢測方法的建立[J];實驗動物科學(xué);2007年02期

4 黃賢波;余旭平;金江烽;;豬細小病毒的研究進展[J];黑龍江畜牧獸醫(yī);2008年11期

5 董沁芳;郭瑤;汪平;程菊會;徐輝;丁先鋒;郭江峰;姜永厚;;豬細小病毒LDR-PCR檢測方法的建立和應(yīng)用[J];生物技術(shù)通報;2012年02期

6 王漢中，，梁莉;應(yīng)用套式PCR檢測豬細小病毒[J];病毒學(xué)報;1996年02期

7 陳先進;豬細小病毒分子生物學(xué)研究進展[J];福建畜牧獸醫(yī);2002年04期

8 黃良宗,梁金華,顧萬軍,羅滿林;豬細小病毒分子生物學(xué)及防制研究進展[J];黑龍江畜牧獸醫(yī);2003年09期

9 魏戰(zhàn)勇;崔保安;黃克和;王學(xué)斌;潘翠玲;郭小權(quán);;硒對豬細小病毒體外增殖抑制作用的研究[J];中國病毒學(xué);2005年06期

10 崔尚金;戚亭;;豬細小病毒的分子生物學(xué)研究[J];豬業(yè)科學(xué);2008年02期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 白安斌;梁家幸;梁保忠;杜堅;趙武;李斌;姚瑞英;黃安國;蔣玉雯;葉敏;楊娟;;豬細小病毒N株耐熱性研究[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會家畜傳染病學(xué)分會第七屆全國會員代表大會暨第十三次學(xué)術(shù)研討會論文集（上冊）[C];2009年

2 何召慶;;豬細小病毒疫苗研究與發(fā)展[A];中國豬業(yè)發(fā)展大會暨中國畜牧業(yè)協(xié)會豬業(yè)分會第二屆會員代表大會論文集[C];2007年

3 王善輝;沈志強;王文秀;;豬細小病毒疫苗的研究進展[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會獸醫(yī)公共衛(wèi)生學(xué)分會第三次學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2012年

4 黃律;袁世山;龍進學(xué);張宏彪;譚濤;;2006-2011年我國部分地區(qū)豬細小病毒4型流行病學(xué)研究[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會獸醫(yī)公共衛(wèi)生學(xué)分會第三次學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2012年

5 杜堅;白安斌;梁保忠;梁家幸;趙武;李斌;黃安國;鄭儒標;馮軍;姚瑞英;陳西寧;蔣玉雯;;豬細小病毒自然弱毒N株的免疫原性研究[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會家畜傳染病學(xué)分會第七屆全國會員代表大會暨第十三次學(xué)術(shù)研討會論文集（上冊）[C];2009年

6 謝紅玲;崔尚金;張超范;崔玉東;陳長木;苗嵐飛;;抗豬細小病毒單克隆抗體雜交瘤細胞株的制備及鑒定[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會動物傳染病學(xué)分會第三屆豬病防控學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2008年

7 陳廷峰;;豬細小病毒診斷方法綜述[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會動物傳染病學(xué)分會第十二次學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2007年

8 呂建強;陳煥春;趙俊龍;;豬細小病毒疫苗的研究進展[A];豬的重要傳染病防治研究新成果——中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會家畜傳染病學(xué)分會第五屆理事會第二次全體會議暨防檢疫專業(yè)委員會第7次學(xué)術(shù)交流會論文集[C];2002年

9 魏戰(zhàn)勇;崔保安;黃克和;王學(xué)斌;;一氧化氮對豬細小病毒體外增殖的影響研究[A];第一屆中國養(yǎng)豬生產(chǎn)和疾病控制技術(shù)大會——2005中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會學(xué)術(shù)年會論文集[C];2005年

10 李金磊;魏戰(zhàn)勇;韓志濤;耿靜微;陳紅英;崔保安;;實時定量PCR對豬細小病毒自然感染豬體內(nèi)病毒分布情況的探討[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會動物傳染病學(xué)分會第四次豬病防控學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2010年

中國重要報紙全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 李瓊璋;俄研制成抗豬繁殖——呼吸綜合征疫苗[N];中國畜牧水產(chǎn)報;2001年

2 ;養(yǎng)豬場疫病防治的技術(shù)措施[N];鄂爾多斯日報;2007年

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 趙俊龍;豬細小病毒基因組序列測定及結(jié)構(gòu)蛋白基因的克隆、表達與基因免疫研究[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2001年

2 羅燕;偽狂犬病毒重組豬細小病毒VP2基因活載體疫苗株的研究[D];四川農(nóng)業(yè)大學(xué);2005年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 崔鵬超;豬細小病毒分子流行病學(xué)調(diào)查以及PPV3VP2蛋白免疫特性的研究[D];南京農(nóng)業(yè)大學(xué);2014年

2 宋傳敏;豬細小病毒SYBR Green real-time PCR檢測方法的建立及應(yīng)用[D];河南農(nóng)業(yè)大學(xué);2009年

3 付慶;斑點免疫金滲濾法檢測豬細小病毒的研究[D];西南農(nóng)業(yè)大學(xué);2003年

4 戎偉;豬細小病毒檢測方法的建立[D];河北農(nóng)業(yè)大學(xué);2004年

5 李昆明;穩(wěn)定分泌抗豬細小病毒單克隆抗體雜交瘤細胞株的建立及初步應(yīng)用[D];河南農(nóng)業(yè)大學(xué);2012年

6 柴書軍;豬細小病毒抗原快速檢測技術(shù)研究[D];河南農(nóng)業(yè)大學(xué);2010年

7 徐靜;豬細小病毒分離鑒定[D];四川農(nóng)業(yè)大學(xué);2001年

8 顧帥;豬細小病毒河南流行株的分離、鑒定及部分生物學(xué)特性研究[D];河南農(nóng)業(yè)大學(xué);2011年

9 王小迪;豬細小病毒單克隆抗體的研制及其初步應(yīng)用[D];揚州大學(xué);2009年

10 付利芝;間接Dot-PPA-ELISA檢測豬細小病毒抗體的研究[D];四川農(nóng)業(yè)大學(xué);2001年

本文編號：1133519