本文關鍵詞：脂環(huán)酸芽孢桿菌D-1的耐鹽內(nèi)切葡聚糖酶基因克隆、表達與酶學性質(zhì)

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【摘要】：【目的】克隆溫泉中嗜熱嗜酸的脂環(huán)酸芽孢桿菌D-1(Alicyclobacillus tengchongensis CGMCC1504)的內(nèi)切葡聚糖酶基因gluE1,并對該酶進行序列分析和重組酶的酶學特性分析�！痉椒ā客ㄟ^全基因組測序獲得gluE1全長,并對其氨基酸序列(GluE1)進行分析。將gluE1重組到載體p EASY-E2中并轉(zhuǎn)化到大腸桿菌BL21(DE3)中異源表達,利用組氨酸標簽純化GluE1并進行酶學性質(zhì)分析�！窘Y(jié)果】gluE1與NCBI數(shù)據(jù)庫中GH5的內(nèi)切葡聚糖酶具有較高的相似性,全長1020 bp,GC含量50.5%,編碼339個氨基酸(40.45 k Da)。GluE1與數(shù)據(jù)庫中序列的最高一致性為97%,與其余纖維素酶的一致性60%。GluE1可水解CMC-Na、可溶性淀粉和大麥β-葡聚糖,表觀最適pH為6.5,pH 5.0 10.0穩(wěn)定并維持60%以上的酶活性。GluE1的表觀最適溫度為55℃,在37℃下穩(wěn)定。在55℃ pH 6.5條件下,GluE1對大麥β-葡聚糖的K_m、V_(max)和k_(cat)分別為8.58 mg/mL、416.67 U/mg和280.90 s~( 1)。GluE1受Ag~+、Hg~(2+)及SDS抑制,β-巰基乙醇、Pb~(2+)、Mg~(2+)、Ca~(2+)和Na~+對GluE1有微弱的促進作用,NaCl對GluE1的影響不大,加入30%的NaCl,仍有64%以上的酶活性;經(jīng)30%的NaCl在37℃下處理60 min,仍能保持93%以上的活性。【結(jié)論】首次報道從Alicyclobacillus屬的細菌中克隆得到內(nèi)切葡聚糖酶基因并對其酶學性質(zhì)進行研究,GluE1具有良好的pH穩(wěn)定性和有較強的耐鹽性,可能具有更大應用潛力。
【作者單位】： 云南師范大學生命科學學院生物能源持續(xù)開發(fā)利用教育部工程中心云南省生物質(zhì)能與環(huán)境生物技術(shù)重點實驗室云南省酶工程技術(shù)研究中心;
【關鍵詞】： 纖維素酶 內(nèi)切葡聚糖酶 異源表達 酶學特性
【基金】：國家自然科學基金(31160229) 云南省教育廳科學研究基金(2015Y104)~~
【分類號】：Q936;Q78
【正文快照】： 纖維素是地球上最豐富的可再生資源,如果能充分利用纖維素資源,將對緩解全球的能源危機,食品和飼料資源緊張以及環(huán)境污染有重大意義[1]。纖維素酶是指所有參與降解纖維素的各種酶的總稱,廣泛存在于多種微生物中,由3種酶組成:內(nèi)切-1,4-β-D-葡聚糖酶(endo-1,4-β-D-glucanases,

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本文編號：1089298