本文關鍵詞：外源脫水應答轉(zhuǎn)錄因子DREB基因在轉(zhuǎn)基因小麥中的誘導型表達與抗干旱生理效果研究(英文)，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

《2005植物分子育種國際學術研討會論文集》2005年

病原物誘導表達的Rs-AFP2基因轉(zhuǎn)化辣椒研究

朱昌叁  羅齊軍  胡木林  袁紅旭  曾富華  

【摘要】：辣椒(Capsicum annuum L.)屬于茄科,是一種重要的蔬菜作物和調(diào)料品,也可以作為園藝觀賞植物。但目前的栽培品種大多易受真菌、細菌、病毒和線蟲類的侵染而引起疫病、青枯病、斑葉病等多種病害,生產(chǎn)上的損失嚴重。隨著植物基因工程技術的發(fā)展和成熟,人們已越來越多地應用該項技術來進行蔬菜作物抗病品種的選育,包括番茄、馬鈴薯等的轉(zhuǎn)基因研究日益深入,成功的例子也日益增多。蘿卜抗真菌蛋白Rs-AFPs 為蘿卜種子中富含半胱氨酸殘基的蛋白,可分為Rs-AFP1和Rs-AFP2兩類,具有較強的耐酸堿性和熱穩(wěn)定性。這類蛋白通過引起菌絲過度分枝或抑制菌絲頂端生長而表現(xiàn)出有效的抗真菌活性。已有人將該蛋白基因置于組成型啟動子或強啟動子控制之下進行超量表達,在煙草、小麥等作物的抗真菌病基因工程中取得了較好的效果。不足之處在于,組成型啟動子或強啟動子控制下的Rs-AFP 基因在轉(zhuǎn)化植物體內(nèi)的高水平表達,對植物本身而言是不經(jīng)濟的,會在相當程度上降低作物的產(chǎn)量,對植物的生長也有不利影響,如導致畸形或死亡;在生態(tài)環(huán)境良好、無病蟲害的生長條件下,外源基因的高水平表達是完全沒有必要的。我們將Rs-AFP2基因置于馬鈴薯中克隆到的,具有很好的受病原真菌誘導的啟動子片段prp1-1控制之下,通過農(nóng)桿菌介導法轉(zhuǎn)化辣椒,以期獲得受病原真菌誘導表達的轉(zhuǎn)化植株。已取得初步結(jié)果:辣椒的遺傳轉(zhuǎn)化以子葉為外植體,在分化培養(yǎng)基上預培養(yǎng)2～3d,葉柄切口處略有膨大時,用OD_(600)值為0.2～0.5的根癌農(nóng)桿菌浸染7～8min,外植體與農(nóng)桿菌在280C 的暗處共培養(yǎng)2～3d,經(jīng)選擇培養(yǎng)獲得抗性芽,分化率為55%,PCR 檢測目的基因已經(jīng)轉(zhuǎn)入辣椒體內(nèi)。誘導分化培養(yǎng)基:MS 基本+6-BA 4.0mg/L(單位下同)+IAA0.5+AgNO_35共培養(yǎng)培養(yǎng)基:MS 基本+6-BA 4.0+IAA 0.5+AgNO_35選擇分化培養(yǎng)基:MS 基本+6-BA 4.0+IAA 0.5+AgNO_35+Kan 20+Cef 300繼代培養(yǎng)基:MS 基本IAA 0.5+AgNO~33+Cef300伸長培養(yǎng)基:MS 基本+6-BA 2.0+IAA 0.2+AgNO_32+GA3 0.5選擇生根培養(yǎng)基:1/2 MS 基本+IAA 0.5+Kan 20以上培養(yǎng)基均加入3%蔗糖、0.8%瓊脂。pH5.8～5.9,培養(yǎng)室溫度26±2℃。光照時間10h/d,光照強度2000～2500Lux。在辣椒的遺傳轉(zhuǎn)化體系建立過程中,再生芽的伸長困難往往會導致實驗失敗,我們通過添加辣椒幼苗提取液(4～5ml/L),較好地解決了該難題;配合添加AgNO_3則有助于防止褐化現(xiàn)象的出現(xiàn)。在農(nóng)桿菌侵染辣椒子葉外植體時添加了100μmol 的乙酰丁香酮有助于提高轉(zhuǎn)化效率。

【作者單位】：
【關鍵詞】：
【分類號】：S641.3
【正文快照】：

病原物誘導表達的Rs-AFP2基因轉(zhuǎn)化辣椒研究@朱昌叁$廣東省湛江師范學院自然科學與技術研究中心!湛江,524048廣東省廣東海洋大學農(nóng)業(yè)生物技術研究所,湛江,524088 @羅齊軍$廣東省湛江師范學院自然科學與技術研究中心!湛江,524048 @胡木林$廣東省湛江師范學院自然科學與技術

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