松墨天;瘜W(xué)感受組織熒光定量PCR內(nèi)參基因的鑒定與篩選
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更多相關(guān)文章: 松墨天牛 內(nèi)參基因 化學(xué)感受 發(fā)育 熒光定量PCR
【摘要】:【目的】本研究擬選擇適合用于分析松墨天牛Monochamus alternatus化學(xué)感受組織中基因表達(dá)的內(nèi)參基因!痉椒ā恳罁(jù)轉(zhuǎn)錄組測(cè)序結(jié)果進(jìn)行內(nèi)參基因鑒定,利用RT-q PCR技術(shù)分析內(nèi)參基因在松墨天牛不同發(fā)育階段和不同性別化學(xué)感受組織間的表達(dá)差異,并利用軟件ge Norm,Norm Finder和Best Keeper比較其表達(dá)的穩(wěn)定性!窘Y(jié)果】松墨天牛轉(zhuǎn)錄組中鑒定出9個(gè)候選內(nèi)參基因(Actin,TUB,18S rRNA,RPS27A,RPS3,RPL10,AK,GAPDH和EF1A),其中后7個(gè)候選內(nèi)參基因在松墨天牛中被首次鑒定,松墨天牛候選內(nèi)參基因和其他昆蟲相應(yīng)基因的同源性很高。9個(gè)候選內(nèi)參基因引物均具有良好的擴(kuò)增效率,18S rRNA的表達(dá)水平最高,EF1A的表達(dá)水平最低;18S rRNA和Actin在不同樣品間的表達(dá)水平差異最大,GAPDH和TUB表達(dá)水平在不同樣品間差異最小。ge Norm和Norm Finder軟件分析認(rèn)為,GAPDH是最穩(wěn)定的內(nèi)參基因,TUB是較為穩(wěn)定的內(nèi)參基因,18S rRNA和Actin是最不穩(wěn)定的內(nèi)參基因;Best Keeper軟件分析認(rèn)為,GAPDH和TUB是合適的內(nèi)參基因,18S rRNA和Actin是不適合的內(nèi)參基因。最適合校正松墨天;瘜W(xué)感受組織中基因表達(dá)數(shù)據(jù)的內(nèi)參基因數(shù)量為2個(gè),即GAPDH和TUB,并且這樣的內(nèi)參基因組合可以用于不同發(fā)育階段和不同性別的不同化學(xué)感受組織!窘Y(jié)論】本研究結(jié)果為利用RT-q PCR技術(shù)準(zhǔn)確分析松墨天牛和其他天;虬ɑ瘜W(xué)感受組織基因相對(duì)表達(dá)量的內(nèi)參基因選擇提供了重要參考。
【作者單位】: 溫州醫(yī)科大學(xué)健康與環(huán)境生態(tài)研究所;
【關(guān)鍵詞】: 松墨天牛 內(nèi)參基因 化學(xué)感受 發(fā)育 熒光定量PCR
【基金】:公益性行業(yè)(農(nóng)業(yè))科研專項(xiàng)基金(201203036)
【分類號(hào)】:S763.38
【正文快照】: 實(shí)時(shí)熒光定量反轉(zhuǎn)錄PCR(real-time quantitativereverse transcription-PCR,RT-q PCR)是分子生物學(xué)領(lǐng)域研究基因表達(dá)的最有效方法之一(Yan et al.,2012)。在RT-q PCR實(shí)驗(yàn)過(guò)程中,起始RNA質(zhì)量、c DNA合成效率等方面的差異可能影響結(jié)果,為了去除這些影響因素,需要引入內(nèi)參基因?qū)?
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本文編號(hào):1062763
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