本文關(guān)鍵詞：花生過敏原蛋白Ara h 6基因克隆和原核表達(dá)

  更多相關(guān)文章： 花生 過敏原 Ara h 基因克隆表達(dá) 質(zhì)譜鑒定

【摘要】：本實(shí)驗首先從花生中提取總RNA,利用反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)技術(shù)克隆了花生過敏原蛋白Ara h 6全c DNA,并以此為模板擴(kuò)增出Ara h 6目的基因。將目的基因與p MD19-T Simple質(zhì)粒進(jìn)行重組后轉(zhuǎn)入BL21(DE3)宿主表達(dá)菌中,異丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷誘導(dǎo)產(chǎn)物表達(dá),并利用鎳離子親和層析純化表達(dá)產(chǎn)物。DNA測序結(jié)果顯示Ara h 6基因片段全長為438 bp,編碼145個氨基酸,與已知該蛋白DNA序列97%相同;十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳結(jié)果顯示表達(dá)產(chǎn)物分子質(zhì)量為24 k D,與融合組氨酸標(biāo)簽的重組Ara h 6蛋白理論分子質(zhì)量相符;質(zhì)譜鑒定結(jié)果表明重組蛋白的一級結(jié)構(gòu)與天然Ara h 6匹配度為100%;Western blotting結(jié)果顯示融合蛋白能夠為抗Ara h 6多克隆抗體所識別,具有免疫原性。
【作者單位】： 南昌大學(xué)食品科學(xué)與技術(shù)國家重點(diǎn)實(shí)驗室中德聯(lián)合研究院;浙江紡織服裝職業(yè)技術(shù)學(xué)院;廣東省疾病預(yù)防控制中心;
【關(guān)鍵詞】： 花生 過敏原 Ara h 基因克隆表達(dá) 質(zhì)譜鑒定
【基金】：“十二五”國家科技支撐計劃項目(2011BAK10B03) 國家高技術(shù)研究發(fā)展計劃(863計劃)項目(2013AA102205) 江西省科技支撐計劃項目(20133BBF60004)
【分類號】：S565.2;TS201.21
【正文快照】： 食物過敏是人體對某些食物產(chǎn)生的變態(tài)反應(yīng),可導(dǎo)致多種臨床病癥,嚴(yán)重的會引起過敏性休克甚至死亡等[1-2]。據(jù)相關(guān)的流行病學(xué)研究表明,食物過敏影響約5%兒童及3%~4%成年人的健康,且呈增長趨勢[3]。90%食物過敏反應(yīng)是由花生、魚、貝類、奶、蛋、大豆、堅果和小麥等八類高致敏性食

【相似文獻(xiàn)】

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本文編號：1047173