本文關(guān)鍵詞：豬瘟病毒亞基因復(fù)制子及其細胞系的構(gòu)建

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【摘要】：為探索豬瘟病毒(CSFV)的復(fù)制機理,本實驗在前期CSFV流行株GD53全基因組測序的基礎(chǔ)上,利用新霉素抗性基因(Neor)替換病毒結(jié)構(gòu)蛋白基因以構(gòu)建CSFV GD53株的亞基因組復(fù)制子(GD53-SGR)。首先構(gòu)建含有T7-5'UTR-N~(pro)-Neor-EMCV/IRES-NS2-NS3-NS4A-NS4B-NS5A-NS5B-3'UTR的重組質(zhì)粒pc DNA-GD53-SGR,將其利用T7 RNA聚合酶經(jīng)體外轉(zhuǎn)錄制備的RNA轉(zhuǎn)錄本轉(zhuǎn)染豬睪丸細胞系(ST)后,利用G418篩選含有GD53-SGR的ST細胞,構(gòu)建ST-GD53-SGR細胞系。酶切鑒定及測序結(jié)果表明,重組質(zhì)粒pc DNA-GD53-SGR構(gòu)建正確,利用T7 RNA聚合酶體外轉(zhuǎn)錄后獲得了與預(yù)期大小一致的GD53-SGR RNA。經(jīng)RT-PCR和間接免疫熒光鑒定結(jié)果表明,獲得了含有GD53-SGR的ST細胞系。本研究構(gòu)建的CSFV ST-GD53-SGR細胞系有助于進一步了解CSFV非結(jié)構(gòu)蛋白的功能,同時為CSFV的復(fù)制機制研究及抗病毒藥物的研發(fā)奠定基礎(chǔ)。
【作者單位】： 吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)動物科技學(xué)院;軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院軍事獸醫(yī)研究所;湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)動物醫(yī)學(xué)學(xué)院;
【關(guān)鍵詞】： 豬瘟病毒 亞基因組復(fù)制子 ST細胞
【基金】：國家自然科學(xué)基金(31130052,31572528) 中國博士后科學(xué)基金面上項目(2013M532129)
【分類號】：S852.65
【正文快照】： 豬瘟是由豬瘟病毒(Classical swine fever virus,同時插入抗性基因及表達調(diào)控序列。最后所構(gòu)建的CSFV)引起的豬的一種以高熱、出血和免疫抑制為亞基因組復(fù)制子GD53-SGR全長為10 309 bp,包括特征的豬烈性傳染病[1]。目前我國流行的豬瘟在臨5'UTR、Npro(18 nt)、Neor、腦心肌炎

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本文編號：1031621