【摘要】：本文研究Fe304-海藻酸鈉固定化重組大腸桿菌BL21 (DE3)PET21-NIT催化水解底物1-氰基環(huán)己基乙腈,得到產(chǎn)物1-氰基環(huán)己基乙酸,這是合成藥物加巴噴丁的中間體。首先,對(duì)Fe304-海藻酸鈉固定化大腸桿菌細(xì)胞的制備條件進(jìn)行了優(yōu)化,最佳固定化條件是：大腸桿菌濃度50 g/L,海藻酸鈉質(zhì)量濃度3%,Fe304質(zhì)量濃度50g/L, CaCl2濃度0.2 mol/L,粒徑大小1.5 nm,最佳pH值為7.0；其次,對(duì)得到的磁性固定化細(xì)胞進(jìn)行了表征,發(fā)現(xiàn)其在外加磁場(chǎng)下可以在幾秒鐘內(nèi)快速分離,相對(duì)于未添加Fe304的海藻酸鈉固定化細(xì)胞,其機(jī)械強(qiáng)度有了顯著提高,在測(cè)試條件下處理3 h,海藻酸鈉固定化細(xì)胞和海藻酸鈉-Fe304磁性固定化細(xì)胞的破碎率分別為90%和30%；。最后,對(duì)海藻酸鈉-Fe304磁性固定化細(xì)胞的各項(xiàng)性能進(jìn)行了測(cè)試。發(fā)現(xiàn)磁性固定化細(xì)胞的pH穩(wěn)定性和熱穩(wěn)定性比游離細(xì)胞有所增強(qiáng),在4度下儲(chǔ)存30天其剩余酶活在60%以上,但是游離細(xì)胞只有40%。海藻酸鈉磁性固定化細(xì)胞作為催化劑重復(fù)利用40批次后,1-氰基環(huán)己基乙酸的產(chǎn)率保持在84%,而海藻酸鈉固定化細(xì)胞為催化劑時(shí),1-氰基環(huán)己基乙酸的產(chǎn)率為70%。在細(xì)胞的基礎(chǔ)上又研究鎳螯合瓊脂糖磁珠作為載體固定化帶有組氨酸標(biāo)簽的腈水解酶。最佳固定化條件為：Buffer A緩沖液中的咪唑濃度為15 mM,腈水解酶的濃度為6 g/L,固定化時(shí)間為30 min,瓊脂糖磁珠最佳加入量針對(duì)不同底物3-氰基吡啶和1-氰基環(huán)己基乙腈分別為3 g/L和4 g/L,最佳反應(yīng)pH值為7。固定化酶與游離酶pH穩(wěn)定性研究表明固定化酶較游離酶更加的穩(wěn)定,固定化酶反應(yīng)8批次后,剩余酶活為68%。
【學(xué)位授予單位】：上海應(yīng)用技術(shù)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類(lèi)號(hào)】：TQ033;Q814.2

【參考文獻(xiàn)】

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1 白永慶;龔福忠;李丹;徐運(yùn)貴;;微乳液的結(jié)構(gòu)性質(zhì)及其應(yīng)用進(jìn)展[J];化工技術(shù)與開(kāi)發(fā);2007年11期

本文編號(hào)：2749026