本文關(guān)鍵詞：新型手性整體柱的制備及其在氨基酸手性拆分中的應用研究

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【摘要】：氨基酸是存在于生命體中的一種重要的手性化合物。隨著對映體手性拆分色譜技術(shù)的發(fā)展,D-型氨基酸被逐漸認為是哺乳動物體內(nèi)的生理功能活性分子及重要的生物標記物。因此,開發(fā)新型手性固定相并應用于生物樣品中微量D-型氨基酸的檢測成為人們關(guān)注的焦點。目前已有多種手性固定相被應用于N-衍生化氨基酸的手性拆分,如:纖維素、環(huán)糊精、奎尼丁等。其中奎尼丁填充柱選擇性好且分離能力突出,被廣泛應用于哺乳動物體內(nèi)氨基酸的手性拆分。但填充柱存在分析時間長,通透性較差和柱壓高等缺點。有機聚合物整體柱具有制備簡單、通透性高、耐酸堿穩(wěn)定性好等特點,可有效改善傳統(tǒng)色譜分離介質(zhì)的不足而備受關(guān)注。因此,本論文的研究重點是設(shè)計和制備具有高手性識別能力的新型功能化手性整體柱,并在此基礎(chǔ)之上開發(fā)基于手性整體柱的離線2D-HPLC技術(shù)用于茶葉中微量D-型氨基酸的分離分析。第一章,系統(tǒng)介紹了氨基酸手性拆分的重要性和常見的拆分方法,并概述了幾類重要的手性固定相的拆分機理及應用。重點對奎尼丁整體柱和環(huán)糊精整體柱的發(fā)展現(xiàn)狀及其在氨基酸手性拆分上的應用進行了詳細綜述,在此基礎(chǔ)上提出了本論文的研究思路及創(chuàng)新點。第二章,以O(shè)-[2-(甲基丙烯酰氧基)乙基氨基甲�；鵠-10,11-二氫奎尼丁(MQD)為功能性單體,十二醇和環(huán)己醇為生孔劑,乙二醇二甲基丙烯酸酯(EDMA)為交聯(lián)劑,偶氮二異丁腈(AIBN)為引發(fā)劑,在內(nèi)徑為100μm的毛細管內(nèi)通過熱致原位聚合反應制備出通透性、選擇性和柱效等均滿足微徑液相色譜模式的poly(MQD-co-EDMA)整體柱,并將其用于44種N-衍生化氨基酸的手性拆分。對比相同分析物在poly(MQD-co-HEMA-co-EDMA)整體柱上的分離結(jié)果,發(fā)現(xiàn)poly(MQD-co-EDMA)整體柱表現(xiàn)出與poly(MQD-co-HEMA-co-EDMA)整體柱相近的手性選擇性,說明共聚單體HEMA對奎尼丁整體柱的手性選擇性影響不大。第三章,為了提高氨基酸在整體柱上的檢測靈敏度,自主構(gòu)建micro-LC/LIF系統(tǒng),并將其與poly(MQD-co-EDMA)整體柱聯(lián)用,用于10種NBD-衍生化氨基酸的手性拆分。研究表明,包含NBD-Arg在內(nèi)的5種NBD-衍生化氨基酸均能在該整體柱上實現(xiàn)基線分離(其中NBD-Arg為首次報道在奎尼丁固定相上實現(xiàn)基線分離),并且發(fā)現(xiàn)除NBD-Glu外的所有氨基酸衍生物的D-型對映體通常被最先洗脫出來。同時對比了NBD-Gln在不同檢測系統(tǒng)下(紫外和熒光)的檢測限和定量限,發(fā)現(xiàn)熒光檢測器的引入使得氨基酸在整體柱上的檢測靈敏度提高了近3000倍,達到了fmol級別。大量L-型氨基酸存在下D-型氨基酸的相對檢測限(RLOD,0.17%)和相對定量限(RLOQ,0.25%)表明,micro-LC/LIF系統(tǒng)與poly(MQD-co-EDMA)整體柱的聯(lián)用有潛力應用于實際樣品中微量D-型氨基酸的分離分析。第四章,在本課題組的前期研究基礎(chǔ)之上,自主構(gòu)建離線2D-HPLC系統(tǒng)(第一維:利用反相C18柱分離茶葉提取物中的不同氨基酸組分;第二維:利用纖維素手性柱Chirakpak?IC-3和poly(MBQD-co-HEMA-co-EDMA)奎尼丁整體柱分別對第一維所收集的各個氨基酸組分進行手性拆分,計算每種氨基酸中D-型對映體的比例),首次對茶葉中的微量D-型氨基酸進行分離分析。結(jié)果顯示,烏龍茶提取物中不同D-型氨基酸對映體的比例分別為Ile(1.09%)、Ser(0.30%)、Asp(0.25%)、Val(0.17%)、Ala(0.07%)和Pro(0.04%)。第五章,以heptakis(2,3-di-O-acetyl)-mono(6-O-methacryloyl)-β-cyclodextrin(HDAM-β-CD)為功能性單體,正丙醇(NPA)、1,4-丁二醇(BDO)和H2O為生孔劑,EDMA為交聯(lián)劑,AIBN為引發(fā)劑,制備出通透性、選擇性和柱效等均滿足微徑液相色譜模式的poly(HDA-β-CD-co-EDMA)整體柱;并對最佳條件下制備的poly(HDA-β-CD-co-EDMA)整體柱的各項物理化學性質(zhì)進行系統(tǒng)表征。第六章,對本論文進行系統(tǒng)總結(jié),并對手性固定相的未來發(fā)展進行展望。
【關(guān)鍵詞】：奎尼丁整體柱 HDAM-β-CD micro-LC/LIF 茶葉 手性氨基酸
【學位授予單位】：暨南大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：O652.63;R917
【目錄】：

• 摘要3-5
• Abstract5-9
• 縮略詞9-10
• 第一章 緒論10-25
• 1.1 研究背景10-11
• 1.2 氨基酸的手性拆分方法11-17
• 1.3 整體柱17-19
• 1.4 奎尼丁整體柱的研究概況19-20
• 1.5 環(huán)糊精整體柱的研究概況20-22
• 1.6 本論文主要研究思路與技術(shù)路線22-25
• 第二章 新型功能化奎尼丁整體柱的制備及其應用研究25-48
• 2.1 引言25-26
• 2.2 實驗部分26-29
• 2.3 結(jié)果與討論29-47
• 2.4 本章結(jié)論47-48
• 第三章 基于奎尼丁整體柱的micro-LC/LIF系統(tǒng)的構(gòu)建與應用研究48-58
• 3.1 引言48-49
• 3.2 實驗部分49-53
• 3.3 結(jié)果與討論53-56
• 3.4 本章結(jié)論56-58
• 第四章 茶葉中微量D-型氨基酸的測定58-74
• 4.1 引言58-59
• 4.2 實驗部分59-63
• 4.3 實驗結(jié)果與討論63-73
• 4.4 結(jié)論73-74
• 第五章 新型乙�；h(huán)糊精整體柱的制備74-90
• 5.1 引言74-75
• 5.2 實驗部分75-80
• 5.3 結(jié)果與討論80-89
• 5.4 結(jié)論89-90
• 第六章 全文總結(jié)與展望90-92
• 參考文獻92-103
• 附錄103-104
• 碩士期間已發(fā)表（待發(fā)表）論文104-105
• 碩士期間申請專利105-106
• 致謝106-107

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本文編號：921890