本文關鍵詞：玉米中酚酸黃酮液質分析方法的建立與應用

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【摘要】：酚酸和黃酮是植物產生的一類次生代謝物,是對人體具有保健作用的天然活性物質,具有抗氧化、抗癌、抗腫瘤等多種生理功能。轉基因作物在對農業(yè)和食品工業(yè)帶來貢獻的同時,因其食用安全性及對生態(tài)環(huán)境潛在的危害性,正面臨著巨大的爭議。代謝組學作為研究生物體代謝產物的一門學科,已成功應用于食品領域。本實驗選擇了玉米中可能存在的香葉木素、香橙素、芹菜素、木犀草素、異鼠李素、橙皮素、柚皮素、蘆丁、槲皮素、金絲桃苷、金雀異黃酮、圣草酚、根皮素、丁香酸、對香豆酸、對羥基苯甲酸、芥子酸、苯甲酸、龍膽酸、反式阿魏酸、香草酸、咖啡酸、沒食子酸、原兒茶酸、香豆酸、肉桂酸、(-)-倍兒茶酸、高原兒茶酸、高香草酸、兒茶素、表兒茶素共三十一種酚酸和黃酮,通過優(yōu)化各項液相條件和質譜條件,建立了靈敏度高、重現(xiàn)性和穩(wěn)定性好的,能同時檢測這三十一種酚酸和黃酮的液質聯(lián)用方法。本實驗還通過優(yōu)化玉米樣品中酚酸和黃酮的提取條件和固相萃取條件,建立了玉米中三十一種酚酸和黃酮的前處理方法。該前處理方法具有較高的回收率,且穩(wěn)定性和重現(xiàn)性良好。本實驗將建立好的玉米中三十一種酚酸和黃酮的前處理方法和LC-MS檢測方法應用于實際樣品,測定了 30種轉基因玉米和14種非轉基因玉米,獲得了每種目標物在不同品種玉米中的種類及含量分布。在此基礎上,對轉基因和非轉基因玉米進行了代謝組學研究。首先對數(shù)據(jù)進行歸一化處理,通過變化倍數(shù)和熱圖,分析三十一種酚酸和黃酮在玉米中的變異范圍及總體分布情況。繼而應用不同的多元統(tǒng)計方法——主成分分析(PCA)、偏最小二乘判別分析(PLS-DA)和正交偏最小二乘判別分析(OPLS-DA),從酚酸和黃酮的角度,實現(xiàn)了轉基因玉米和非轉基因玉米的分離,并找到造成組間差異的代謝物,最后結合單維T-檢驗確定具有統(tǒng)計學意義的差異代謝物。
【關鍵詞】：玉米 液質聯(lián)用 酚酸 黃酮 代謝組學
【學位授予單位】：天津科技大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：O657.63;TS213.4
【目錄】：

• 摘要4-5
• abstract5-8
• 1 前言8-18
• 1.1 轉基因玉米概述8-10
• 1.1.1 轉基因玉米的導入基因和導入方法8
• 1.1.2 轉基因玉米的檢測技術8
• 1.1.3 轉基因玉米的安全性評價8-10
• 1.2 酚酸和黃酮概述10-13
• 1.2.1 酚酸和黃酮的定義及分布10
• 1.2.2 酚酸和黃酮的結構及分類10-11
• 1.2.3 酚酸和黃酮的作用及功能11-12
• 1.2.4 酚酸和黃酮的提取方法12-13
• 1.2.5 酚酸和黃酮的純化方法13
• 1.3 代謝組學概述13-16
• 1.3.1 代謝組學簡介13-14
• 1.3.2 代謝組學的研究策略14
• 1.3.3 代謝組學的分析技術14-15
• 1.3.4 代謝組學的研究流程15-16
• 1.3.5 代謝組學的應用和挑戰(zhàn)16
• 1.4 課題研究的目的、意義及主要研究內容16-18
• 1.4.1 課題研究的目的及意義16-17
• 1.4.2 課題研究的主要內容17-18
• 2 材料與方法18-26
• 2.1 實驗藥品與器材18-20
• 2.1.1 酚酸和黃酮標準品18-19
• 2.1.2 化學試劑與藥品19
• 2.1.3 儀器設備與材料19-20
• 2.2 實驗方法20-23
• 2.2.1 酚酸和黃酮標準品儲備液及工作液的配制20-21
• 2.2.3 樣品前處理方法21
• 2.2.4 樣品的測定方法21-23
• 2.2.5 LC-MS/MS的定性及定量方法23
• 2.2.6 基質效應評價23
• 2.3 轉基因和非轉基因玉米的代謝物分析23-26
• 2.3.1 代謝組學數(shù)據(jù)預處理23-24
• 2.3.2 代謝組學數(shù)據(jù)分析24-26
• 3 結果與討論26-68
• 3.1 LC-MS/MS條件的優(yōu)化26-50
• 3.1.1 質譜條件的優(yōu)化26-38
• 3.1.2 液相條件的優(yōu)化38-50
• 3.2 固相萃取條件的優(yōu)化50-55
• 3.2.1 固相萃取柱的選擇50-51
• 3.2.2 固相萃取上樣液pH的優(yōu)化51-52
• 3.2.3 固相萃取淋洗液比例的優(yōu)化52-53
• 3.2.4 固相萃取淋洗液體積的優(yōu)化53-54
• 3.2.5 固相萃取洗脫液體積的優(yōu)化54-55
• 3.3 樣品提取條件的優(yōu)化55-57
• 3.3.1 提取溶劑選擇55-56
• 3.3.2 提取溶劑比例的優(yōu)化56
• 3.3.3 料液比的優(yōu)化56-57
• 3.3.4 超聲時間的優(yōu)化57
• 3.4 方法性能評價57-61
• 3.4.1 方法的分析特征量58-59
• 3.4.2 基質效應評價59
• 3.4.3 基質加標回收實驗59-61
• 3.5 實際樣品的測定61
• 3.6 轉基因和非轉基因玉米的代謝物分析61-68
• 3.6.1 變異范圍分析61-62
• 3.6.2 熱圖分析62-63
• 3.6.3 主成分分析(PCA)63-64
• 3.6.4 偏最小二乘判別分析(PLS-DA)64-66
• 3.6.5 正交偏最小二乘判別分析(OPLS-DA)66-67
• 3.6.6 差異代謝物的確定67-68
• 4 結論68-69
• 5 展望69-70
• 6 參考文獻70-76
• 7 攻讀碩士期間發(fā)表論文情況76-77
• 8 致謝77

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本文編號：880067