本文關(guān)鍵詞：秋水仙堿修飾的納米硒靶向MCF-7細(xì)胞誘導(dǎo)其凋亡的研究

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【摘要】：硒納米材料具有很好的生物活性,可通過偶聯(lián)或吸附對(duì)納米硒進(jìn)行各種修飾。基于原子力顯微鏡在納米水平表征藥物的細(xì)胞毒性是一種新興的藥物藥效評(píng)估方法,本文制備了秋水仙堿修飾的納米硒顆粒,采用紅外光譜儀,紫外可見分光光度儀,高倍透射電鏡以及Nano-ZS納米粒度儀對(duì)所制備秋水仙堿修飾納米硒的形貌結(jié)構(gòu)及穩(wěn)定性進(jìn)行表征,同時(shí)利用CCK-8、流式細(xì)胞分析儀、激光共聚焦顯微鏡(CLSM)及原子力顯微鏡(AFM)等評(píng)價(jià)秋水仙堿修飾的納米硒對(duì)乳腺癌MCF-7細(xì)胞毒性作用及抑制血管生成作用。本課題主要獲得了以下創(chuàng)新性成果1.在有秋水仙堿分子存在的水溶液體系中,以殼聚糖(CS)為穩(wěn)定劑和包覆劑,利用抗壞血酸還原亞硒酸鈉的方法合成球形納米硒顆粒,該納米硒顆粒的平均粒徑為70 nm,秋水仙堿通過其羧酸部分的-OH鍵與納米硒表面發(fā)生作用并吸附到納米顆粒的表面,從而使秋水仙堿成功穩(wěn)定的修飾上納米硒顆粒2.CCK-8實(shí)驗(yàn)和流式細(xì)胞儀檢測(cè)結(jié)果表明秋水仙堿納米硒能夠抑制人乳腺癌細(xì)胞MCF-7細(xì)胞的增殖,誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡,且對(duì)正常細(xì)胞殺傷作用較小;流式細(xì)胞儀檢測(cè)結(jié)果表明,秋水仙堿納米硒能抑制細(xì)胞增殖且將細(xì)胞周期阻滯在S期;通過CLSM成像觀察,秋水仙堿納米硒能夠顯著破壞MCF-7細(xì)胞微管網(wǎng)狀結(jié)構(gòu),抑制紡錘體形成及細(xì)胞的遷移運(yùn)動(dòng),同時(shí)利用原子力顯微鏡對(duì)秋水仙堿納米硒作用細(xì)胞前后的細(xì)胞形貌、表面超微結(jié)構(gòu)進(jìn)行掃描成像,結(jié)果顯示,隨藥物濃度的增加,細(xì)胞形貌發(fā)生顯著性變化,細(xì)胞膜遭到不同程度的破壞,膜表面平均粗糙度和膜表面納米顆粒的平均粒徑增大。3.秋水仙堿納米硒作用于血管內(nèi)皮細(xì)胞(HUVEC)后,細(xì)胞存活率下降;流式細(xì)胞儀結(jié)果表明,秋水仙堿納米硒能夠誘導(dǎo)HUVEC的凋亡和壞死;體外小管形成實(shí)驗(yàn)表明,藥物能夠阻礙HUVEC細(xì)胞小管生成,體內(nèi)實(shí)驗(yàn)雞胚尿囊膜血管形成實(shí)驗(yàn)說明,秋水仙堿納米硒能夠抑制血管生成。綜上所述,秋水仙堿納米硒通過破壞細(xì)胞微管動(dòng)態(tài)平衡,抑制細(xì)胞增殖,誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。此外,秋水仙堿納米硒還能夠通過抑制血管內(nèi)皮細(xì)胞的增殖,從而抑制血管的生成,這些結(jié)果表明,秋水仙堿納米硒能夠成為一種潛在的抗癌藥物。
【關(guān)鍵詞】：秋水仙堿修飾納米硒 MCF-7細(xì)胞 HUVEC 微管 抗血管生成 原子顯微鏡
【學(xué)位授予單位】：暨南大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R96;O613.52
【目錄】：

• 摘要3-5
• Abstract5-10
• 第一章 緒論10-23
• 1 原子力顯微鏡10-18
• 1.1 原子力顯微鏡的工作原理及模式10-14
• 1.2 原子力顯微鏡在生物學(xué)上的優(yōu)勢(shì)14-15
• 1.3 原子力顯微鏡在生物學(xué)上的應(yīng)用15-18
• 2 靶向微管的抗腫瘤作用18-21
• 2.1 微管的結(jié)構(gòu)和作用19
• 2.2 微管蛋白抑制劑的抗腫瘤作用研究進(jìn)展19-21
• 3 納米硒的研究背景21-23
• 3.1 納米硒的生物活性21
• 3.2 納米硒抗癌活性的研究進(jìn)展21-23
• 第二章 秋水仙堿修飾納米硒的制備與表征23-31
• 1 前言23
• 2 實(shí)驗(yàn)材料與方法23-25
• 2.1 實(shí)驗(yàn)儀器與試劑23-24
• 2.2 實(shí)驗(yàn)步驟與方法24-25
• 3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與討論25-29
• 3.1 紫外光譜結(jié)果25-26
• 3.2 紅外吸收光譜結(jié)果26-27
• 3.3 納米粒度表針結(jié)果27-28
• 3.4 透射電鏡表征結(jié)果28-29
• 4 本章小結(jié)29-31
• 第三章 秋水仙堿納米硒對(duì)人MCF-7 細(xì)胞凋亡情況的影響31-45
• 1 前言31
• 2 實(shí)驗(yàn)材料與方法31-35
• 2.1 實(shí)驗(yàn)試劑與材料31-32
• 2.2 細(xì)胞方法和步驟32-35
• 3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與討論35-43
• 3.1 秋水仙堿納米硒對(duì)MCF-7 細(xì)胞增殖抑制實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析35-36
• 3.2 細(xì)胞凋亡和壞死分布分析36-37
• 3.3 MCF-7 細(xì)胞周期分布分析37-39
• 3.4 細(xì)胞骨架微管蛋白表達(dá)檢測(cè)結(jié)果分析39-40
• 3.5 激光共聚焦顯微鏡觀察秋水仙堿納米硒對(duì)MCF-7 細(xì)胞微管系統(tǒng)的影響40-41
• 3.6 原子力顯微鏡對(duì)MCF-7 形貌的的影響41-43
• 4 本章總結(jié)43-45
• 第四章 COL-Se NPs抑制HUVEC細(xì)胞的增殖與抗血管生成作用45-59
• 1 前言45
• 2 實(shí)驗(yàn)材料和方法45-49
• 2.1 實(shí)驗(yàn)材料與儀器45-46
• 2.2 細(xì)胞方法和步驟46-49
• 3 結(jié)果與討論49-57
• 3.1 CCK-8 細(xì)胞增殖抑制實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析49
• 3.2 細(xì)胞凋亡與壞死檢測(cè)結(jié)果分析49-50
• 3.3 細(xì)胞骨架微管蛋白的表達(dá)結(jié)果分析50-51
• 3.4 激光共聚焦顯微鏡觀察秋水仙堿納米硒對(duì)HUVEC細(xì)胞微管系統(tǒng)的影響51-53
• 3.5 原子力顯微鏡對(duì)HUVEC形貌的的影響53-55
• 3.6 秋水仙堿納米硒對(duì)HUVEC遷移能力的影響55
• 3.7 秋水仙堿納米硒抑制HUVEC小管的形成55-56
• 3.8 雞胚絨毛尿囊膜（CAM）實(shí)驗(yàn)56-57
• 4 本章小結(jié)57-59
• 展望59-60
• 參考文獻(xiàn)60-67
• 附錄一 英文縮略語67-68
• 攻讀碩士期間科研工作情況68-70
• 致謝70

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