發(fā)布時(shí)間：2017-08-29 05:39

  本文關(guān)鍵詞：基于切刻內(nèi)切酶信號(hào)放大的電致化學(xué)發(fā)光DNA生物傳感器的研究

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【摘要】：利用切刻內(nèi)切酶的酶切作用實(shí)現(xiàn)信號(hào)放大,結(jié)合量子點(diǎn)高效的電化學(xué)發(fā)光性能,構(gòu)建了一種新型電化學(xué)發(fā)光DNA生物傳感器。將捕獲探針DNA(c-DNA)通過(guò)自組裝的方式固定到金電極表面,后與目標(biāo)DNA(t-DNA)互補(bǔ)雜交形成雙鏈DNA,利用切刻內(nèi)切酶Nt.Bst NBI特異性識(shí)別雙鏈上的酶切位點(diǎn)(5'-GAGTC-3'),然后在c-DNA相應(yīng)的切割位點(diǎn)(識(shí)別序列3'端后的4個(gè)堿基處)對(duì)其進(jìn)行剪切,釋放出目標(biāo)鏈,參與下一輪的雜交及酶切,通過(guò)目標(biāo)物的循環(huán)利用,實(shí)現(xiàn)信號(hào)放大。利用N-羥基琥珀酰亞胺(NHS)和1-乙基-3-3-二甲基氨丙基碳化二亞胺(EDC)活化羧基化Cd Te量子點(diǎn)表面的羧基,與電極表面殘留的c-DNA末端的氨基共價(jià)交聯(lián),通過(guò)測(cè)定捕獲的量子點(diǎn)的電化學(xué)發(fā)光信號(hào)對(duì)目標(biāo)DNA進(jìn)行檢測(cè)。優(yōu)化后的檢測(cè)條件為:c-DNA濃度1μmol/L,雜交時(shí)間60 min,Nt.Bst NBI濃度0.5 U/μL,酶切反應(yīng)時(shí)間4 h。在優(yōu)化條件下,目標(biāo)DNA濃度在2.0×10~(-13)~2.0×10~(-11)mol/L范圍內(nèi),其對(duì)數(shù)與電化學(xué)發(fā)光強(qiáng)度呈線性關(guān)系,檢出限為7.3×10~(-14) mol/L。人體血樣加標(biāo)回收率為96.4%~108.0%。
【作者單位】： 電磁化學(xué)功能物質(zhì)廣西重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室桂林理工大學(xué)化學(xué)與生物工程學(xué)院;
【關(guān)鍵詞】： DNA生物傳感器 切刻內(nèi)切酶 量子點(diǎn) 電致化學(xué)發(fā)光 信號(hào)放大
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目(Nos.21165007,21375031)資助~~
【分類號(hào)】：O657.1;TP212
【正文快照】： 1引言近年來(lái),隨著生命科學(xué)的不斷發(fā)展,低濃度特定DNA序列的超靈敏檢測(cè)在臨床診斷、基因突變檢測(cè)等生物學(xué)研究中顯示出越來(lái)越重要的作用和意義[1~4]。與熒光法[5]、石英晶體微天平法[6]、比色法[7]等眾多的DNA檢測(cè)方法相比,電化學(xué)發(fā)光法因其方法簡(jiǎn)單、響應(yīng)速度快、靈敏度高和選

【相似文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

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3 向清祥;楊孝容;熊俊如;陳家軒;李尚前;李艷;;含萘磺�；蟓h(huán)多胺金屬配合物與DNA的相互作用[A];中國(guó)化學(xué)會(huì)第四屆有機(jī)化學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文集（下冊(cè)）[C];2005年

4 黃俊騰;張陽(yáng);劉海洋;;鎵(Ⅲ)咔咯與DNA相互作用的圓二色光譜研究[A];全國(guó)第十六屆大環(huán)化學(xué)暨第八屆超分子化學(xué)學(xué)術(shù)討論會(huì)論文摘要集[C];2012年

5 王曄;汪志勇;;新型金屬-DNA納米雜合物的合成及其在有機(jī)反應(yīng)中的催化作用研究[A];第十六屆全國(guó)金屬有機(jī)化學(xué)學(xué)術(shù)討論會(huì)論文集[C];2010年

6 陳永潔;王雪松;;具有DNA光開(kāi)關(guān)和光斷裂雙重活性的釕芳烴配合物[A];第十三屆全國(guó)光化學(xué)學(xué)術(shù)討論會(huì)論文集[C];2013年

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8 宋鳳瑞;劉寧;閆存玉;劉志強(qiáng);劉淑瑩;;DNA分子與生物堿類化合物的非共價(jià)復(fù)合作用的電噴霧質(zhì)譜研究[A];中國(guó)有機(jī)質(zhì)譜學(xué)第十二屆全國(guó)學(xué)術(shù)大會(huì)論文集[C];2003年

9 劉小榮;邵娜;;DNA-Ag NCs發(fā)光機(jī)理的研究及其對(duì)溶菌酶的熒光傳感識(shí)別[A];中國(guó)化學(xué)會(huì)第29屆學(xué)術(shù)年會(huì)摘要集——第04分會(huì)：納米生物傳感新方法[C];2014年

10 陳博;周翔;;β-取代陽(yáng)離子卟啉的合成及其與DNA相互作用的研究[A];中國(guó)化學(xué)會(huì)第四屆有機(jī)化學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C];2005年

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本文編號(hào)：751628