發(fā)布時(shí)間：2017-08-18 07:41

  本文關(guān)鍵詞：基于EXOⅢ酶的熒光信號(hào)放大探針的高靈敏基因檢測(cè)及凝膠電泳技術(shù)篩選細(xì)胞核酸適配體

  更多相關(guān)文章： EXOⅢ酶 信號(hào)放大探針 基因檢測(cè) 凝膠電泳 細(xì)胞 核酸適配體

【摘要】：本文第一部分就信號(hào)放大技術(shù)及其在基因檢測(cè)方面的應(yīng)用作了相關(guān)研究。首先,用活化的PAA(MW=8000)交聯(lián)Fe_3O_4磁性納米粒制得表面帶有活化羧基的Fe_3O_4磁珠。利用氨基-羧基反應(yīng)將氨基化的熒光核酸探針固定在Fe_3O_4磁珠表面,制備了熒光核酸探針-Fe_3O_4磁珠復(fù)合物。Fe_3O_4磁珠不僅能夠作為分離載體,還能夠有效淬滅熒光核酸探針上的熒光基團(tuán),降低了背景熒光信號(hào),為后續(xù)熒光信號(hào)放大奠定了基礎(chǔ)。在加入待測(cè)靶分子后,靶分子與熒光核酸探針通過(guò)堿基互補(bǔ)形成雙鏈,利用核酸外切酶EXOⅢ獨(dú)特的水解特性,使得EXOⅢ水解探針并釋放出靶分子和熒光信號(hào)。靶分子繼續(xù)和過(guò)量的熒光核酸探針雜交,使EXOⅢ繼續(xù)水解釋放靶分子和熒光信號(hào),這樣熒光信號(hào)得到顯著放大,建立了基于EXOⅢ輔助的循環(huán)信號(hào)放大的DNA檢測(cè)體系。與傳統(tǒng)的分子信標(biāo)方法相比,該方法靈敏度更高,熒光信號(hào)放大能力更為顯著。此外,將雙熒光標(biāo)記的熒光探針混合,能夠通過(guò)熒光檢測(cè)信號(hào)的不同對(duì)基因SNP進(jìn)行快速分型。近年來(lái),越來(lái)越多的核酸探針應(yīng)用于識(shí)別和捕獲檢測(cè)癌細(xì)胞,用于癌癥的早期診斷和治療。核酸適配體是一種單鏈DNA/RNA探針,類(lèi)似抗體,能夠作為分子探針廣泛應(yīng)用于分子生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域。本文第二部分基于瓊脂糖凝膠電泳技術(shù),結(jié)合基于細(xì)胞的指數(shù)富集的配體系統(tǒng)進(jìn)化技術(shù)(Cell-SELEX),對(duì)完整的靶細(xì)胞進(jìn)行核酸適體篩選。以急性早幼粒細(xì)胞白血病細(xì)胞HL-60為靶細(xì)胞,將靶細(xì)胞固定于瓊脂糖凝膠中,通過(guò)電泳過(guò)程中ssDNA與靶細(xì)胞的親和力不同而導(dǎo)致的電泳遷移率不同,分離出強(qiáng)特異性的核酸適體。通過(guò)對(duì)電泳、PCR等條件的優(yōu)化,經(jīng)5輪篩選從原始隨機(jī)ssDNA文庫(kù)中初步篩選出了對(duì)HL-60細(xì)胞特異性結(jié)合的核酸適體。
【關(guān)鍵詞】：EXOⅢ酶 信號(hào)放大探針 基因檢測(cè) 凝膠電泳 細(xì)胞 核酸適配體
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類(lèi)號(hào)】：O657.3;R440
【目錄】：

• 中文摘要4-5
• Abstract5-9
• 序言9-24
• 1. 信號(hào)放大技術(shù)9-15
• 1.1 信號(hào)放大技術(shù)概述9
• 1.2 基于核酸外切酶輔助的靶分子循環(huán)信號(hào)放大技術(shù)9-14
• 1.3 基于核酸外切酶輔助的靶分子循環(huán)信號(hào)放大技術(shù)在基因檢測(cè)中的應(yīng)用14-15
• 2. 核酸適配體的篩選15-23
• 2.1 核酸適配體概述15-16
• 2.2 核酸適體的篩選方法16-21
• 2.3 核酸適體的應(yīng)用21-23
• 3. 本文的立題思想和研究?jī)?nèi)容23-24
• 第一部分 熒光信號(hào)放大探針在基因檢測(cè)中的應(yīng)用24-41
• 第一章 基于EXOⅢ酶的熒光信號(hào)放大探針的SNP基因分型及定量測(cè)定24-41
• 1. 引言24-25
• 2. 實(shí)驗(yàn)25-28
• 3. 結(jié)果與討論28-39
• 4. 小結(jié)39-41
• 第二部分 細(xì)胞核酸適配體篩選41-65
• 第二章 建立基于瓊脂糖凝膠電泳的HL-60細(xì)胞適體篩選方法41-50
• 1. 引言41
• 2．實(shí)驗(yàn)41-45
• 3. 結(jié)果與討論45-49
• 4．小結(jié)49-50
• 第三章 單鏈次級(jí)文庫(kù)的制備50-56
• 1. 引言50
• 2. 實(shí)驗(yàn)50-52
• 3. 結(jié)果與討論52-55
• 4. 小結(jié)55-56
• 第四章 基于瓊脂糖凝膠電泳的HL-60細(xì)胞適配體篩選56-65
• 1. 引言56
• 2. 實(shí)驗(yàn)56-59
• 3. 結(jié)果與討論59-64
• 4. 小結(jié)64-65
• 結(jié)論與展望65-66
• 參考文獻(xiàn)66-74
• 攻讀學(xué)位期間本人出版或公開(kāi)發(fā)表的論著、論文74-75
• 致謝75-76

【相似文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前3條

1 吳世康;分子熒光信號(hào)器件和光控分子開(kāi)關(guān)研究的現(xiàn)狀和進(jìn)展[J];化學(xué)進(jìn)展;1994年04期

2 張玉平,楊世植,洪津,張彪,孟凡剛,龔平,張玉亮;葉綠素?zé)晒鈨x中微弱熒光信號(hào)的探測(cè)[J];量子電子學(xué)報(bào);2005年02期

3 ;[J];;年期

中國(guó)重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前3條

1 袁玉強(qiáng);馮繼宏;何浩;李開(kāi)祥;白樺娟;;一種高靈敏度熒光激發(fā)與檢測(cè)系統(tǒng)的研制[A];第八屆全國(guó)光生物學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文摘要集[C];2013年

2 ;Preparation and Application of Carbohydrate Microarrays for Analyzing Human Serum Antibody-Carbohydrate Interaction[A];中國(guó)資源生物技術(shù)與糖工程學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2005年

3 汪潔;王立強(qiáng);石巖;鄭華;陸祖康;;激光誘導(dǎo)熒光檢測(cè)中聚焦光斑對(duì)熒光強(qiáng)度的影響[A];中國(guó)光學(xué)學(xué)會(huì)2006年學(xué)術(shù)大會(huì)論文摘要集[C];2006年

中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 郭秋平;熒光信號(hào)放大檢測(cè)技術(shù)在生物大分子檢測(cè)中的研究和應(yīng)用[D];湖南大學(xué);2011年

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前5條

1 陳哲;基于EXOⅢ酶的熒光信號(hào)放大探針的高靈敏基因檢測(cè)及凝膠電泳技術(shù)篩選細(xì)胞核酸適配體[D];蘇州大學(xué);2016年

2 劉娟容;實(shí)時(shí)PCR儀熒光信號(hào)監(jiān)測(cè)系統(tǒng)的研究[D];浙江大學(xué);2011年

3 朱鳳芝;基于紫外熒光信號(hào)的人民幣真?zhèn)舞b別裝置的研究[D];天津大學(xué);2004年

4 楊野喬;基于嵌入式的熒光信號(hào)采集系統(tǒng)[D];電子科技大學(xué);2011年

5 劉星倜;外切酶Ⅲ循環(huán)結(jié)合G-四倍體的免標(biāo)記熒光信號(hào)放大策略在生物傳感領(lǐng)域的應(yīng)用[D];山東大學(xué);2014年

，

本文編號(hào)：693412