本文關(guān)鍵詞：免疫層析快速檢測(cè)呋喃唑酮代謝物的方法研究

  更多相關(guān)文章： Fe3O4/Au CdTe 金磁探針 熒光探針 呋喃唑酮代謝物 試紙條

【摘要】：免疫層析試紙條具有特異性強(qiáng)、靈敏度高、方法簡(jiǎn)捷、分析容量大、檢測(cè)成本低等優(yōu)點(diǎn),定性檢測(cè)不需要儀器輔助,且樣品前處理步驟簡(jiǎn)單方便,非常適合現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè),并且可以提供系列化的產(chǎn)品以及技術(shù)產(chǎn)品可以商業(yè)化,不僅為檢測(cè)行業(yè)提供幫助,并能為社會(huì)創(chuàng)造經(jīng)濟(jì)價(jià)值。本課題研究設(shè)計(jì)了兩種免疫層析快速檢測(cè)試紙條,分別用金磁復(fù)合微粒和CdTe量子點(diǎn)代替膠體金標(biāo)記AOZ單抗,結(jié)合了納米標(biāo)記技術(shù)與免疫層析技術(shù),通過(guò)金磁微球標(biāo)記和CdTe QDs熒光標(biāo)記抗體,與同等膠體金標(biāo)記相比,提高了靈敏度,在定性分析中,前者可直接通過(guò)裸眼判斷,后者通過(guò)便攜式紫外燈照射,在定量分析中,前者可通過(guò)磁性號(hào)分析儀,后者通過(guò)熒光讀數(shù)儀可分別讀取層析載體上三維的磁性號(hào)和熒光信號(hào),直接得到信號(hào)值,通過(guò)建立標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn),定量檢測(cè)值。本課題中制備了粒徑均一、分散性好的多層金磁復(fù)合微粒,并成功與AOZ單克隆抗體進(jìn)行偶聯(lián),探索到最佳偶聯(lián)條件為:pH為7.4的環(huán)境下,1 mg金磁復(fù)合微粒表面偶聯(lián)AOZ-Mc Ab的最佳含量為170μg,投入抗體含量480μg,偶聯(lián)率為35.43%,用含5%BSA,pH=7.4的Pbs的封閉劑封閉50 min,最后探針保存于含0.2%BSA、2%蔗糖、0.8%Triton-X-100、0.05%PVP、0.2%Tween-20、0.02%NaN3的Pbs中�？蔀槠渌贵w的磁微粒標(biāo)記提供參考。并對(duì)層析墊上材料進(jìn)行了優(yōu)選,包括硝酸纖維素膜、樣品墊和結(jié)合墊,分別選用Satorius CN140、GL-b02、Ahlstrom8964;并對(duì)樣品墊及結(jié)合墊處理液進(jìn)行了探究實(shí)驗(yàn),分別將含0.5%BSA、2%曲拉通、0.2%NaCl、2%PVP的超純水溶液作為最佳樣品墊處理液及含1%蔗糖、0.2%曲拉通、0.2%Tween-20的超純水溶液作為最佳結(jié)合墊處理液;將以上所得物成功組裝成AOZ金磁免疫層析試紙條,并對(duì)該試紙條的性能進(jìn)行了評(píng)估,該試紙條靈敏度為8 ng/mL,與硝基呋喃類(lèi)代謝物無(wú)交叉反應(yīng),特異性較好、重復(fù)性佳,常溫保存一年,4℃可保存長(zhǎng)達(dá)2年,穩(wěn)定性?xún)?yōu)良。本課題中制備了粒徑均一、分散性好,量子產(chǎn)率高達(dá)42.3%的高量子產(chǎn)率熒光CdTe QDs,具有良好的光譜性能的可作為標(biāo)記抗體的優(yōu)良熒光材料;優(yōu)選了量子點(diǎn)溶液的純化方案,即丙酮沉淀法優(yōu)于透析純化,對(duì)量子點(diǎn)的處理具有較高的參考價(jià)值;對(duì)熒光探針的偶聯(lián)條件進(jìn)行了優(yōu)化,選擇反應(yīng)50 min作為CdTeAOZ-Mc Ab探針的最佳偶聯(lián)時(shí)間及AOZ-Mc Ab最佳使用量為QDs與AOZ-Mc Ab之比為1:0.75。得到具有優(yōu)良光譜性能的熒光探針,為其他熒光材料標(biāo)記抗體提供可行性偶聯(lián)方法參考;對(duì)層析墊上材料進(jìn)行了優(yōu)選,包括硝酸纖維素膜、樣品墊和結(jié)合墊,分別選用Millipore 135、GL-b02、Ahlstrom8964。在以上條件下成功制得AOZ熒光免疫層析試紙條,并對(duì)該試紙條的性能進(jìn)行了評(píng)估,靈敏度為5 ng/mL,與硝基呋喃類(lèi)代謝物沒(méi)有交叉反應(yīng),特異性較好、重復(fù)性及穩(wěn)定性?xún)?yōu)良。作為以上兩種試紙條的對(duì)比,本研究制備了AOZ金標(biāo)試紙條。采用最佳試紙條材料及處理方法處理后組裝成AOZ金標(biāo)試紙條,靈敏度為10 ng/mL,性能檢測(cè)優(yōu)良。通過(guò)該試紙條的制作,進(jìn)一步證明了本研究的磁性試紙條和熒光試紙條具有靈敏度高的優(yōu)點(diǎn),通過(guò)儀器輔助后試紙條的靈敏度可增加1-2個(gè)數(shù)量級(jí),遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過(guò)市場(chǎng)上已有產(chǎn)品的檢測(cè)限,不僅可彌補(bǔ)金標(biāo)試紙條的缺陷,也為新型試紙條的研制奠定基礎(chǔ),具有較大的研究意義和開(kāi)發(fā)價(jià)值。
【關(guān)鍵詞】：Fe3O4/Au CdTe 金磁探針 熒光探針 呋喃唑酮代謝物 試紙條
【學(xué)位授予單位】：上海師范大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類(lèi)號(hào)】：O652
【目錄】：

• 摘要3-5
• Abstract5-9
• 主要符號(hào)表9-10
• 第1章 緒論10-21
• 1.1 呋喃唑酮及其代謝物的的理化性質(zhì)10-11
• 1.2 呋喃唑酮對(duì)食品的污染及殘留限量11
• 1.3 呋喃唑酮?dú)埩魴z測(cè)方法11-13
• 1.3.1 高效液相色譜法12
• 1.3.2 液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)12
• 1.3.3 免疫分析法12-13
• 1.4 免疫層析技術(shù)13-14
• 1.4.1 免疫層析相關(guān)納米粒子13-14
• 1.4.2 基于納米粒子的檢測(cè)14
• 1.4.3 膠體金免疫層析技術(shù)14
• 1.5 磁性免疫層析技術(shù)14-16
• 1.6 熒光免疫層析技術(shù)16-19
• 1.6.1 熒光量子點(diǎn)應(yīng)用研究進(jìn)展17
• 1.6.2 作為生物探針的量子點(diǎn)17-18
• 1.6.3 量子點(diǎn)免疫檢測(cè)技術(shù)18-19
• 1.7 本課題的研究目的和主要內(nèi)容19-21
• 1.7.1 研究目的19-20
• 1.7.2 主要內(nèi)容20-21
• 第2章 AOZ金磁免疫層析試紙條21-37
• 2.1 實(shí)驗(yàn)材料與儀器21-22
• 2.1.1 實(shí)驗(yàn)材料22
• 2.1.2 實(shí)驗(yàn)儀器22
• 2.2 實(shí)驗(yàn)方法22-29
• 2.2.1 多層復(fù)合金磁納米顆粒（Fe3O4/Au）的制備22-23
• 2.2.2 金磁-AOZ-McAb探針的制備及條件的優(yōu)化23-25
• 2.2.3 AOZ金磁免疫層析試紙條的組裝及組裝材料優(yōu)選25-28
• 2.2.4 AOZ的衍生化28
• 2.2.5 AOZ金磁免疫層析試紙條的性能評(píng)價(jià)28-29
• 2.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析29-36
• 2.3.1 多層復(fù)合金磁納米顆粒（Fe3O4/Au）的鑒定29-30
• 2.3.2 金磁-AOZ-McAb探針制備的條件優(yōu)化30-33
• 2.3.3 AOZ金磁免疫層析試紙條的組裝33-34
• 2.3.4 AOZ金磁免疫層析試紙條的性能評(píng)價(jià)34-36
• 2.4 本章小結(jié)36-37
• 第3章 AOZ熒光免疫層析試紙條37-53
• 3.1 實(shí)驗(yàn)材料與儀器37-38
• 3.1.1 實(shí)驗(yàn)材料37-38
• 3.1.2 實(shí)驗(yàn)儀器38
• 3.2 實(shí)驗(yàn)方法38-43
• 3.2.1 CdTe熒光量子點(diǎn)的制備及純化38-39
• 3.2.2 CdTe -AOZ-McAb探針的制備及偶聯(lián)條件優(yōu)化39-40
• 3.2.3 AOZ熒光免疫層析試紙條的組裝及組裝條件優(yōu)化40-42
• 3.2.4 AOZ熒光試紙條性能測(cè)試42-43
• 3.2.5 AOZ金標(biāo)試紙條的研制43
• 3.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析43-52
• 3.3.1 CdTe熒光量子點(diǎn)的鑒定43-46
• 3.3.3 CdTe -AOZ-McAb探針的制備46-48
• 3.3.4 AOZ熒光免疫層析試紙條的組裝及組裝條件優(yōu)化48-50
• 3.3.5 AOZ熒光試紙條性能測(cè)試50-52
• 3.3.6 AOZ金標(biāo)試紙條的研制52
• 3.4 本章小結(jié)52-53
• 第4章 總結(jié)與展望53-55
• 參考文獻(xiàn)55-62
• 攻讀碩士期間的研究成果62-63
• 致謝63-64

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1 李建武;宋春美;劉芳;吳淑燕;李浩林;劉程;邱實(shí);曾海娟;吳Z，

本文編號(hào)：626395