分子量是蛋白質(zhì)的重要特征參數(shù),準(zhǔn)確測(cè)定蛋白質(zhì)分子量對(duì)研究蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)與功能具有重要意義。該文以牛血清蛋白(BSA)和人血清免疫球蛋白(IgG)為研究對(duì)象,采用分析超速離心-沉降速率法(AUC-SV)測(cè)定2種蛋白的分子量,并系統(tǒng)研究了樣品初始濃度、離心轉(zhuǎn)速、離心時(shí)間、離心溫度、樣品上樣體積和緩沖液體系等實(shí)驗(yàn)條件對(duì)測(cè)定結(jié)果的影響。結(jié)果表明:離心轉(zhuǎn)速為20 000～40 000 r/min時(shí),影響不明顯,樣品初始濃度、離心時(shí)間、離心溫度、緩沖液體系的適宜范圍較寬,樣品上樣體積對(duì)測(cè)定結(jié)果的影響顯著。在優(yōu)化的實(shí)驗(yàn)條件下,測(cè)得未知蛋白的分子量為39.9 kDa,與質(zhì)譜法測(cè)定結(jié)果(40.0 kDa)一致。該方法具有適宜條件范圍寬、非破壞性、無(wú)需標(biāo)準(zhǔn)品和普適性高等優(yōu)點(diǎn),適用于未知蛋白分子量的測(cè)定。此外,相關(guān)研究結(jié)論還可供AUC-SV初學(xué)者學(xué)習(xí)借鑒。

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圖1未知蛋白質(zhì)分子量測(cè)定結(jié)果

在上述優(yōu)化的實(shí)驗(yàn)條件下，以PBS為緩沖體系，測(cè)定未知蛋白質(zhì)的分子量，并與質(zhì)譜測(cè)定結(jié)果進(jìn)行比較，如圖1所示，表示蛋白質(zhì)濃度c分布與沉降系數(shù)s分布的對(duì)應(yīng)關(guān)系。AUC-SV法和MALDI-TOF/TOF質(zhì)譜法測(cè)得該蛋白質(zhì)分子量分別為39.9kDa（圖1(a)）和40.0kDa（圖1....

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