本文關(guān)鍵詞：靈芝菌絲體和子實(shí)體中三萜酸的高效提取及其組分初步分析，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：靈芝三萜酸是除多糖外靈芝中最主要的活性成分,具有廣泛的藥理作用。然而,目前市場(chǎng)上三萜酸產(chǎn)品稀少,價(jià)格昂貴,嚴(yán)重阻礙了對(duì)其藥理和應(yīng)用開(kāi)發(fā)的進(jìn)一步研究。因此,對(duì)不同來(lái)源的靈芝材料進(jìn)行三萜酸的提取并對(duì)其組分進(jìn)行分析具有重要的現(xiàn)實(shí)意義。本論文以靈芝子實(shí)體和菌絲體為研究對(duì)象,分別對(duì)其三萜酸的提取技術(shù)進(jìn)行了試驗(yàn),在此基礎(chǔ)上,對(duì)三萜酸的組分進(jìn)行了初步分析,并對(duì)相應(yīng)產(chǎn)品的穩(wěn)定性進(jìn)行了研究,得出以下主要結(jié)果：1.以靈芝子實(shí)體為研究對(duì)象,通過(guò)對(duì)比實(shí)驗(yàn)確定以無(wú)水乙醇為提取溶劑,不經(jīng)酶預(yù)處理的回流提取法作為研究靈芝子實(shí)體中三萜酸高效提取的基礎(chǔ)。進(jìn)一步進(jìn)行單因素實(shí)驗(yàn)、Box-Benhnken設(shè)計(jì)以及響應(yīng)面法優(yōu)化。以液料比(A)、提取時(shí)間(B)和提取次數(shù)(C)為提取的關(guān)鍵因素,通過(guò)Box-Benhnken設(shè)計(jì)及響應(yīng)面法優(yōu)化,得到了可預(yù)測(cè)靈芝了實(shí)體三萜酸提取率的回歸模型：Y=0.33+0.003125A+0.021B-0.014C+0.0005AB-0.019AC-0.005BC-0.044A2-0.040B2-0.032C2.經(jīng)分析,得到提取靈芝子實(shí)體中三萜酸的最佳條件為：液料比25：1,提取時(shí)間2h,提取次數(shù)3次。最優(yōu)條件下的子實(shí)體三萜酸提取率為(0.335±0.008)mg/g,與模型預(yù)測(cè)值相符。2.以靈芝CGMCC5.616菌株為研究對(duì)象,通過(guò)搖瓶發(fā)酵獲得大量菌絲體。確定以無(wú)水乙醇進(jìn)行回流提取的前提下,采用單因素實(shí)驗(yàn)考察液料比、提取時(shí)間和提取次數(shù)等對(duì)靈芝菌絲體三萜酸提取率的影響,然后通過(guò)中心組合旋轉(zhuǎn)設(shè)計(jì)和響應(yīng)面優(yōu)化實(shí)驗(yàn),得到了靈芝菌絲體三萜酸提取率對(duì)這三個(gè)因素的多元回歸方程：Y=0.52+0.022A+0.027B+0.064C+0.021AB-0.013AC+0.010BC-0.056A2-0.094B2-0.057C2。確定了最佳提取條件為：液料比12：1,提取時(shí)間2h,提取次數(shù)3次。驗(yàn)證試驗(yàn)結(jié)果表明菌絲體三萜酸提取率為(0.537±0.005))mg/g,與模型預(yù)測(cè)值相符。3.以ADS-8大孔樹(shù)脂為媒介,對(duì)提取的靈芝三萜酸進(jìn)行了初分離。考察了洗脫流速對(duì)靈芝菌絲體三萜酸的影響,液相色譜分析顯示,不同流速下洗脫出的三萜酸組成不同,特別是保留時(shí)間為44.66mmin的色譜峰在含量上差異較大；當(dāng)流速為3mL/min時(shí),與1 mL/min,2mL/min條件下相比,洗出了兩個(gè)新的組分峰(保留時(shí)間分別為66.27min和67.31min)。另外,乙醇濃度對(duì)菌絲體三萜酸的洗脫有顯著影響,70%-90%的乙醇可將三萜酸完全洗脫下來(lái),60%的乙醇可洗脫下大部分的三萜酸,而40%和20%的乙醇洗脫效果不理想。高效液相色譜進(jìn)一步分析表明,菌絲體和子實(shí)體中三萜酸的組分存在著明顯差異,子實(shí)體中三萜酸成分出峰較晚,且組分相對(duì)較多。4.采用LC-ESI-MS分析靈芝菌絲體中三萜酸成分,結(jié)果顯示,菌絲體中含有少量的靈芝酸A和靈芝酸B。另外,菌絲體中兩個(gè)主要的洗脫峰,一個(gè)為靈芝酸A的類(lèi)似物,另一個(gè)為Ganolucidic acid B的類(lèi)似物,但其具體結(jié)構(gòu)還有待進(jìn)一步確定。5.三萜酸對(duì)溶劑的穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果表明,菌絲體與子實(shí)體三萜酸的穩(wěn)定性相似,都受酸催化的影響,與溶劑的極性無(wú)關(guān)。對(duì)溫度的穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果表明,在溫度為25℃及以下時(shí),子實(shí)體和菌絲體三萜酸相對(duì)較穩(wěn)定；隨著溫度的升高,兩類(lèi)三萜酸都有不同程度的降解。
【關(guān)鍵詞】：靈芝 三萜酸 響應(yīng)面法 組分 穩(wěn)定性
【學(xué)位授予單位】：中南林業(yè)科技大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類(lèi)號(hào)】：O652;R284.2
【目錄】：

• 摘要4-6
• ABSTRACT6-11
• 1 緒論11-23
• 1.1 靈芝概況11-12
• 1.2 靈芝三萜的結(jié)構(gòu)12-13
• 1.3 靈芝三萜酸的藥理作用及構(gòu)效關(guān)系13-16
• 1.3.1 靈芝三帖酸的藥理作用13-15
• 1.3.2 靈芝三帖酸的構(gòu)效關(guān)系15-16
• 1.4 靈芝三萜液體發(fā)酵16
• 1.5 靈芝三萜酸的提取方法16-18
• 1.5.1 有機(jī)溶劑浸提法17
• 1.5.2 傳統(tǒng)回流法17
• 1.5.3 超聲波提取法17-18
• 1.5.4 微波萃取法18
• 1.5.5 超臨界CO2萃取法18
• 1.6 靈芝三萜酸的分離純化18-20
• 1.6.1 靈芝三萜酸的初分離18-19
• 1.6.2 靈芝三萜酸的再分離純化19-20
• 1.7 靈芝三萜酸的分析20-21
• 1.7.1 薄層層析法(TLC)20
• 1.7.2 紫外分光光度法20
• 1.7.3 高效液相色譜(HPLC)20-21
• 1.7.4 液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)21
• 1.8 論文研究的目的、意義及主要內(nèi)容21-23
• 1.8.1 目的和意義21-22
• 1.8.2 主要研究?jī)?nèi)容22-23
• 2 靈芝子實(shí)體中三萜酸的提取研究23-37
• 2.1 試驗(yàn)材料23-24
• 2.1.1 材料23
• 2.1.2 主要試劑23-24
• 2.1.3 主要儀器24
• 2.2 試驗(yàn)方法24-26
• 2.2.1 靈芝子實(shí)體的粉碎24
• 2.2.2 熊果酸標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制24-25
• 2.2.3 靈芝子實(shí)體中三萜酸含量的測(cè)定25-26
• 2.2.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析26
• 2.3 結(jié)果與討論26-36
• 2.3.1 熊果酸標(biāo)準(zhǔn)曲線制作26
• 2.3.2 靈芝子實(shí)體中三萜酸的提取工藝研究26-29
• 2.3.3 回流法提取工藝參數(shù)的確定29-31
• 2.3.4 響應(yīng)面優(yōu)化試驗(yàn)31-36
• 2.4 小結(jié)與討論36-37
• 3 靈芝菌絲體中三萜酸的提取工藝研究37-51
• 3.1 實(shí)驗(yàn)材料37-38
• 3.1.1 菌種37
• 3.1.2 主要試劑37-38
• 3.1.3 主要儀器38
• 3.1.4 培養(yǎng)基38
• 3.2 實(shí)驗(yàn)方法38-40
• 3.2.1 菌絲體的制備38-39
• 3.2.2 熊果酸標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制39
• 3.2.3 靈芝菌絲體三萜酸含量的測(cè)定39-40
• 3.2.4 數(shù)據(jù)分析40
• 3.3 結(jié)果與討論40-49
• 3.3.1 熊果酸標(biāo)準(zhǔn)曲線制作40
• 3.3.2 不同提取溶劑對(duì)靈芝菌絲體三萜酸提取率的影響40-41
• 3.3.3 纖維素酶預(yù)處理對(duì)靈芝菌絲體三萜酸提取率的影響41
• 3.3.4 不同提取方法對(duì)靈芝菌絲體三萜酸提取率的影響41-42
• 3.3.5 回流法提取工藝參數(shù)的確定42-44
• 3.3.6 響應(yīng)面優(yōu)化試驗(yàn)44-49
• 3.4 小節(jié)與討論49-51
• 4 靈芝三萜酸的組分及其穩(wěn)定性研究51-71
• 4.1 試驗(yàn)材料51-53
• 4.1.1 材料51-52
• 4.1.2 主要試劑52
• 4.1.3 主要儀器52-53
• 4.2 實(shí)驗(yàn)方法53-56
• 4.2.1 靈芝三萜酸提取液的制備53
• 4.2.2 大孔樹(shù)脂吸附分離53-54
• 4.2.3 高相液相色譜(HPLC)分析54-55
• 4.2.4 質(zhì)譜(MS)分析55
• 4.2.5 靈芝三萜酸的穩(wěn)定性55-56
• 4.3 結(jié)果與討論56-70
• 4.3.1 菌絲體和子實(shí)體三萜酸的組分差異56-57
• 4.3.2 洗脫條件對(duì)三萜酸組分的影響57-59
• 4.3.3 靈芝酸標(biāo)準(zhǔn)品的ESI/MS分析59-64
• 4.3.4 菌絲體中三萜酸成分的鑒定64-66
• 4.3.5 三萜酸的穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)66-70
• 4.4 小節(jié)與討論70-71
• 5 主要結(jié)論71-73
• 參考文獻(xiàn)73-81
• 附錄A (攻讀學(xué)位期間的主要學(xué)術(shù)成果)81-83
• 致謝83

【參考文獻(xiàn)】

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  本文關(guān)鍵詞：靈芝菌絲體和子實(shí)體中三萜酸的高效提取及其組分初步分析，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

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本文編號(hào)：389908