隨著蛋白質(zhì)組學(xué)與生命科學(xué)研究的飛速發(fā)展,相關(guān)分析與檢測技術(shù)越來越得到研究者們的重視。其中,質(zhì)譜分析技術(shù)因其高通量和可精確定量等特性而成為蛋白質(zhì)組學(xué)研究中不可或缺的工具。作為蛋白質(zhì)組學(xué)研究的一個重要內(nèi)容,巰基翻譯后修飾因其與許多疾病如腫瘤、神經(jīng)退行性疾病等的密切聯(lián)系而受到廣泛關(guān)注,針對它的質(zhì)譜定量技術(shù)也是一個非�；钴S的研究領(lǐng)域,在生命科學(xué)領(lǐng)域扮演著越來越重要的角色。本論文將介紹相關(guān)研究背景以及我們在含巰基的多肽質(zhì)譜定量技術(shù)研究中所做得努力,具體工作主要有以下兩方面:一、發(fā)展了一種新的標(biāo)記定量方法用于含巰基的半胱氨肽相對與絕對定量分析。所選用的兩種化學(xué)結(jié)構(gòu)相似的標(biāo)記物N-甲基馬來酰亞胺(NMM)與N-乙基馬來酰亞胺(NEM)可以通過邁克爾加成反應(yīng)特異性的標(biāo)記巰基。這種反應(yīng)快速,高靈敏,高特異性,并且可以在溫和的反應(yīng)條件下進(jìn)行。由于化學(xué)結(jié)構(gòu)的微小差異,這種技術(shù)無論在相對還是絕對定量模式下都能提供可靠的定量結(jié)果。并且,這種方法可以對幾乎所有含巰基的多肽及其它生物分子進(jìn)行高靈敏檢測,絕對定量檢測極限可達(dá)納摩爾濃度數(shù)量級,且可對復(fù)雜的蛋白質(zhì)酶解液進(jìn)行標(biāo)記定量。與傳統(tǒng)的同位素試劑盒相比,試劑成本幾乎...

【文章頁數(shù)】：98 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
Abstract
第一章 緒論
    1.1 巰基翻譯后修飾與質(zhì)譜技術(shù)簡介
        1.1.1 巰基翻譯后修飾的分類及其生物學(xué)意義
        1.1.2 巰基亞硝基化修飾水平的檢測方法
        1.1.3 質(zhì)譜技術(shù)簡介
    1.2 定量蛋白質(zhì)組學(xué)及其應(yīng)用
        1.2.1 定量蛋白質(zhì)組學(xué)基本概念與在生物領(lǐng)域中的應(yīng)用
        1.2.2 常用的質(zhì)譜標(biāo)記定量方法概述
        1.2.3 非同位素標(biāo)記內(nèi)標(biāo)定量法
    1.3 細(xì)胞凋亡酶-3及其活性檢測
        1.3.1 細(xì)胞凋亡酶-3簡介
        1.3.2 細(xì)胞凋亡酶-3活性檢測的生物學(xué)意義
        1.3.3 常見的酶活性檢測方法
    1.4 質(zhì)譜技術(shù)在酶活性檢測中的應(yīng)用
        1.4.1 MALDI質(zhì)譜在酶活性檢測中的應(yīng)用
        1.4.2 其它質(zhì)譜技術(shù)在酶活性檢測中的應(yīng)用
    1.5 本研究課題的選題依據(jù)
    參考文獻(xiàn)
第二章 基于雙馬來酰亞胺標(biāo)記技術(shù)的半胱氨肽相對和絕對定量法
    2.1 引言
    2.2 實(shí)驗(yàn)部分
        2.2.1 實(shí)驗(yàn)儀器與試劑
            2.2.1.1 實(shí)驗(yàn)儀器
            2.2.1.2 實(shí)驗(yàn)試劑
        2.2.2 半胱氨肽的選擇性標(biāo)記
        2.2.3 標(biāo)記效率的測定
        2.2.4 標(biāo)記反應(yīng)的動態(tài)范圍
        2.2.5 半胱氨肽相對和絕對定量
        2.2.6 復(fù)雜背景下的定量穩(wěn)定性裝與蛋白樣品的富集
        2.2.7 含有半胱氨酸的蛋白質(zhì)酶解組裝與蛋白樣品的富集
        2.2.8 MALDI-TOF分析
    2.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與討論
        2.3.1 設(shè)計(jì)策略
        2.3.2 半胱計(jì)策氨肽的特異性標(biāo)記
        2.3.3 標(biāo)記反應(yīng)條件優(yōu)化
        2.3.4 標(biāo)記效率和靈敏度
        2.3.5 比值測定的可重復(fù)性
        2.3.6 半胱氨肽的絕對定量
        2.3.7 半胱氨肽相對定量
        2.3.8 含半胱氨酸蛋白的相對定量
    2.4 小結(jié)
    參考文獻(xiàn)
第三章 雙馬來酰亞胺標(biāo)記定量法在細(xì)胞凋亡酶-3活性檢測中的應(yīng)用
    3.1 引言
    3.2 實(shí)驗(yàn)部分
        3.2.1 實(shí)驗(yàn)儀器及試劑
            3.2.1.1 實(shí)驗(yàn)儀器
            3.2.1.2 實(shí)驗(yàn)試劑
        3.2.2 多肽酶活性質(zhì)譜探針的制備
        3.2.3 多肽探針的酶切反應(yīng)及酶特異性檢測
        3.2.4 體外酶活性檢測與抑制劑篩選
        3.2.5 細(xì)胞裂解液中的酶活性檢測
    3.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果討論
        3.3.1 多肽酶活性質(zhì)譜探針的制備
        3.3.2 雙馬來酰亞胺標(biāo)記定量法在Caspase-3酶活性檢測中的應(yīng)用
        3.3.3 體外酶活性檢測與抑制劑篩選
        3.3.4 細(xì)胞裂解液中的酶活性檢測
    3.4 小結(jié)
    參考文獻(xiàn)
第四章 結(jié)論與展望
    4.1 結(jié)論
    4.2 展望
碩士期間發(fā)表的論文和專利
致謝



本文編號：3827628