發(fā)布時間：2023-04-27 01:01

　　毛細(xì)管電泳(Capillary electrophoresis,CE)又稱高效毛細(xì)管電泳(High-performance capillary electrophoresis,HPCE),是目前應(yīng)用非常廣泛的一種分離分析技術(shù)。因具有高效、快速和樣品消耗少等特點,非常適用于小分子RNA(microRNA,miRNA)這些易分解化合物的分離分析。MiRNA是一系列內(nèi)源性的、非編碼的短鏈小分子RNA,對生物體內(nèi)基因的表達(dá)起著關(guān)鍵性的作用,許多癌癥和疾病的發(fā)生都與特定miRNA的異常表達(dá)有著密切的關(guān)系。目前miRNA已逐漸成為重要的疾病診斷的生物標(biāo)志物。miRNA的分析技術(shù)貫穿miRNA的研究和藥物研發(fā)過程,并起到關(guān)鍵作用。因此,研究對miRNA的分離和高靈敏度檢測技術(shù)在未來的臨床診斷中有著非常重要的作用。本論文主要由以下幾個部分組成:第一章,主要對CE的研究進(jìn)展、分離模式、檢測方法、進(jìn)樣方式和在線富集技術(shù)等進(jìn)行了綜述。此外,還對miRNA及其檢測方法進(jìn)行了介紹。第二章,采用高速毛細(xì)管電泳(HSCE)激光誘導(dǎo)熒光檢測法(LIF),在動態(tài)凝膠電泳模式下對3個miRNA,miRNA-156、miR...

【文章頁數(shù)】：87 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
Abstract
第一章 緒論
    1.1 毛細(xì)管電泳簡介
        1.1.1 毛細(xì)管電泳的發(fā)展歷史
        1.1.2 毛細(xì)管電泳的原理
        1.1.3 高速毛細(xì)管電泳
        1.1.4 毛細(xì)管的分離模式
            1.1.4.1 毛細(xì)管區(qū)帶電泳
            1.1.4.2 毛細(xì)管凝膠電泳
            1.1.4.3 毛細(xì)管膠束電動色譜
            1.1.4.4 毛細(xì)管等電聚焦
            1.1.4.5 毛細(xì)管等速電泳
            1.1.4.6 毛細(xì)管電色譜
    1.2 毛細(xì)管電泳的檢測方式
        1.2.1 激光誘導(dǎo)熒光檢測法
        1.2.2 電化學(xué)檢測法
            1.2.2.1 安培檢測法
            1.2.2.2 電導(dǎo)檢測法
            1.2.2.3 電位檢測法
        1.2.3 化學(xué)發(fā)光檢法
        1.2.4 紫外/可見吸收檢測法
        1.2.5 質(zhì)譜檢測法
    1.3 毛細(xì)管電泳的進(jìn)樣方式
        1.3.1 常規(guī)毛細(xì)管電泳的進(jìn)樣方式
            1.3.1.1 電動進(jìn)樣
            1.3.1.2 擴散進(jìn)樣
            1.3.1.3 壓力進(jìn)樣
            1.3.1.4 自發(fā)進(jìn)樣
        1.3.2 HSCE進(jìn)樣方式-缺口管進(jìn)樣
    1.4 毛細(xì)管電泳在線富集技術(shù)
        1.4.1 堆積
            1.4.1.1 場放大樣品堆積
            1.4.1.2 大體積樣品堆積
            1.4.1.3 場放大樣品進(jìn)樣
        1.4.2 固相萃取
        1.4.3 瞬時等速電泳
    1.5 MicroRNA簡介
    1.6 MicroRNA的檢測技術(shù)
        1.6.1 Northern Blotting法
        1.6.2 微陣列芯片技術(shù)
        1.6.3 反轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)
        1.6.4 滾環(huán)擴增技術(shù)
        1.6.5 均相LCR方法
        1.6.6 雜交鏈?zhǔn)椒磻?yīng)
        1.6.7 CE在miRNA分析中的應(yīng)用
    1.7 本論文研究內(nèi)容簡介
第二章 基于短毛細(xì)管高速電泳系統(tǒng)快速分離檢測芭蕉葉中的miRNA
    2.1 引言
    2.2 實驗部分
        2.2.1. 高速毛細(xì)管電泳系統(tǒng)
        2.2.2 試劑
        2.2.3 實驗儀器
        2.2.4 溶液的配制
        2.2.5 樣品溶液的制備
        2.2.6 實驗步驟
        2.2.7 電泳條件
    2.3 結(jié)果與討論
        2.3.1 無場放大進(jìn)樣
        2.3.2 進(jìn)樣方式的對比
        2.3.3 有無去光反饋對比
    2.4 動態(tài)凝膠電泳分離條件優(yōu)化
        2.4.1 緩沖液體系的選擇
        2.4.2 pH的優(yōu)化
        2.4.3 篩分介質(zhì)HEC濃度的選擇
        2.4.4 篩分介質(zhì)PVP濃度的選擇
        2.4.5 分離電壓的優(yōu)化
        2.4.6 緩沖液濃度的優(yōu)化
    2.5 工作曲線和檢測限
    2.6 DNA探針的特異性
    2.7 香蕉葉中miRNA分析
        2.7.1 回收率的測定
    2.8 結(jié)論
第三章 基于核酸等溫雜交鏈?zhǔn)椒磻?yīng)與短毛細(xì)管高速電泳聯(lián)用技術(shù)快速分離檢測A549細(xì)胞中的miRNA
    3.1 引言
    3.2 實驗部分
        3.2.1 試劑
        3.2.2 實驗儀器
        3.2.3 溶液的配制
    3.3 實驗步驟
    3.4 基于HCR與超濾管高靈敏度檢測miRNA的實驗原理
    3.5 miRNA引發(fā)HCR反應(yīng)的驗證
    3.6 采用超濾管去除H1、H2單體的可行性分析
    3.7 等溫雜交鏈?zhǔn)椒磻?yīng)產(chǎn)物峰合并的條件優(yōu)化
        3.7.1 緩沖液類型的選擇
        3.7.2 毛細(xì)管有效長度的優(yōu)化
        3.7.3 緩沖液pH值的優(yōu)化
        3.7.4 篩分介質(zhì)HEC的優(yōu)化
        3.7.5 分離電壓的優(yōu)化
    3.8 等溫雜交鏈?zhǔn)椒磻?yīng)條件的優(yōu)化
        3.8.1 等溫雜交鏈?zhǔn)椒磻?yīng)時間的優(yōu)化
        3.8.2 等溫雜交鏈?zhǔn)椒磻?yīng)體系pH的優(yōu)化
    3.9 工作曲線和檢測限
    3.10 DNA探針的特異性
    3.11 A549細(xì)胞中的miRNA分析
        3.11.1 回收率的測定
    3.12 結(jié)論
第四章 集成銅微儲液池的毛細(xì)管高速電泳快速分離檢測木瓜葉中的miRNA
    4.1 引言
    4.2 實驗部分
        4.2.1 試劑
        4.2.2 實驗儀器
        4.2.3 溶液配制
        4.2.4 實驗裝置
            4.2.4.1 激光誘導(dǎo)熒光檢測系統(tǒng)
            4.2.4.2 短毛細(xì)管高速電泳分離系統(tǒng)
        4.2.5 實驗步驟
    4.3 裝置重現(xiàn)性的考察
    4.4 結(jié)果與討論
        4.4.1 miRNA-156與C2分離條件的優(yōu)化
            4.4.1.1 運行緩沖液pH值的優(yōu)化
            4.4.1.2 篩分介質(zhì)PVP含量的優(yōu)化
            4.4.1.3 篩分介質(zhì)HEC含量的優(yōu)化
            4.4.1.4 分離電壓的優(yōu)化
        4.4.2 工作曲線和檢測限
        4.4.3 木瓜葉中miRNA的測定
        4.4.4 回收率的測定
    4.5 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝
個人簡歷



本文編號：3802545