旨在研究菜豆環(huán)氧水解酶PvEH2對(duì)映歸一性水解外消旋(rac-)間硝基環(huán)氧苯乙烷(mNSO)的特性,為制備光學(xué)純(R)-間硝基苯乙二醇(mNPED)提供優(yōu)良的生物催化劑。構(gòu)建表達(dá)有重組PvEH2的工程茵E.coli/pveh2。以rac-mNSO為底物,借助手性色譜法分析E.coli/pveh2全細(xì)胞的EH活性和區(qū)域選擇性�；谟袡C(jī)助溶劑種類(lèi)和劑量對(duì)酶活性的影響,篩選并優(yōu)化緩沖液/助溶劑反應(yīng)體系。結(jié)果顯示,在菜豆植株中,PvEH2基因的轉(zhuǎn)錄水平可能受體外環(huán)境誘導(dǎo)因素的影響。E.colil/pveh2的EH活性為15.4 U/g_{干細(xì)胞},水解反應(yīng)的區(qū)域選擇性系數(shù)α_s和β_R分別為90.3%和96.4%。在經(jīng)過(guò)篩選優(yōu)化的含有5%(V/V)丙三醇的磷酸鹽緩沖液中,最高底物濃度為40 mmol/L,是原緩沖液體系的4倍。當(dāng)反應(yīng)至12h時(shí),所得(R)-mNPED的光學(xué)純度ee_p及產(chǎn)率分別為84.9%和90.2%。E.coli/pveh2或PvEH2在水解rac-mNSO中表現(xiàn)出優(yōu)秀的區(qū)域選擇性,在制備光學(xué)純(R)...

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【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 材料
        1.1.1 菌株、質(zhì)粒和培養(yǎng)基
        1.1.2 試劑盒與工具酶
    1.2 方法
        1.2.1 基因擴(kuò)增
        1.2.2 基因表達(dá)
        1.2.3 細(xì)胞EH活性的測(cè)定
        1.2.4 區(qū)域選擇性系數(shù)的測(cè)定
        1.2.5 緩沖液體系中的歸一性水解反應(yīng)
        1.2.6 助溶劑種類(lèi)與劑量的篩選
        1.2.7 緩沖液/助溶劑體系中的歸一性水解反應(yīng)
2 結(jié)果
    2.1 Pv EH2基因的生物信息學(xué)分析
    2.2 全細(xì)胞EH活性與SDS-PAGE檢測(cè)結(jié)果
    2.3 E.coli/pveh2針對(duì)rac-m NSO的對(duì)映歸一性水解
        2.3.1 E.coli/pveh2的區(qū)域選擇性
        2.3.2 緩沖液體系中底物濃度對(duì)轉(zhuǎn)化率的影響
        2.3.3 底物助溶劑對(duì)全細(xì)胞EH活性的影響
        2.3.4 緩沖液/丙三醇體系中的歸一性水解
3 討論
4 結(jié)論



本文編號(hào)：3744052