本文關(guān)鍵詞：檢測細(xì)胞內(nèi)活性小分子的新型熒光比率探針的設(shè)計(jì)、合成與應(yīng)用，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：熒光法由于其具有選擇性好、靈敏度高、快速簡便等優(yōu)點(diǎn)，近年在生物學(xué)、化學(xué)及醫(yī)學(xué)領(lǐng)域，針對細(xì)胞內(nèi)生物活性小分子檢測得到了廣泛應(yīng)用。但是目前熒光分析法大多通過單個(gè)發(fā)射峰強(qiáng)度的增加或降低來達(dá)到檢測目的，這種方法容易受到外界條件的巨大影響，而出現(xiàn)假陽性結(jié)果。比率熒光法是用不同位置的兩個(gè)發(fā)射峰強(qiáng)度的比值來檢測，這樣可以避免如探針濃度、光源強(qiáng)度的波動(dòng)、儀器的靈敏度等引起的檢測誤差，因此可以提高方法的選擇性、靈敏度和檢測范圍，尤其是同一激發(fā)不同發(fā)射的熒光比率探針可以更進(jìn)一步降低分析方法的誤差。 熒光比率探針通常需要雙熒光的產(chǎn)生，產(chǎn)生雙熒光發(fā)射的方法有兩種，雙發(fā)色團(tuán)與單發(fā)色團(tuán)。雙發(fā)色團(tuán)是指兩個(gè)不同的熒光團(tuán)各自發(fā)射出相應(yīng)的熒光波長，單發(fā)色團(tuán)是指發(fā)光團(tuán)與待測物反應(yīng)前后，熒光發(fā)射波長或是吸收波長產(chǎn)生了藍(lán)移或紅移。目前，對于基于單發(fā)色團(tuán)的熒光比率探針已有大量報(bào)道，而對于雙發(fā)色團(tuán)的熒光比率探針研究較少，尤其是使用同一激發(fā)不同發(fā)射的熒光比率探針更為少見。此外，對于雙發(fā)色團(tuán)熒光比率探針來說，雙發(fā)色團(tuán)之間的連接基團(tuán)（linker）極其重要，不同的鏈接對探針的熒光性質(zhì)影響巨大，因此連接基團(tuán)的選擇是比率探針設(shè)計(jì)中的重要內(nèi)容。 針對以上對熒光比率探針設(shè)計(jì)合成的要求，本論文展開了下面兩方面的工作： （一）氯離子主要存在于細(xì)胞的酸性細(xì)胞器內(nèi)，，目前報(bào)道的氯離子熒光比率探針都是不同激發(fā)的，這些探針也沒有做到檢測溶酶體內(nèi)氯離子。同時(shí)，連接基團(tuán)（linker）對于雙發(fā)色團(tuán)熒光比率探針有著重要的作用，它對探針的光學(xué)性質(zhì)影響巨大。針對以上問題，本文以6-甲氧基喹啉為氯離子敏感基團(tuán)，具有定位溶酶體功能的丹磺酰胺作為氯離子不敏感基團(tuán)，分別利用3個(gè)亞甲基、N-亞基哌嗪、卞溴3個(gè)不同的鏈接將兩個(gè)熒光團(tuán)連接起來，設(shè)計(jì)合成了3個(gè)同一激發(fā)不同發(fā)射的檢測氯離子的熒光比率型探針。其中以3個(gè)亞甲基為鏈接的探針對氯離子基本沒有響應(yīng)。當(dāng)連接基團(tuán)為N-亞基哌嗪時(shí)，探針則是隨著氯離子濃度的增大，6-甲氧基喹啉部分和丹磺酰胺部分的熒光強(qiáng)度同時(shí)降低，其對氯離子的響應(yīng)情況也不令人滿意。而用溴卞為連接基團(tuán)的探針對氯離子表現(xiàn)出了較好的選擇性和較高的靈敏度，并且能夠瞬間對氯離子濃度的變化作出響應(yīng)。6-甲氧基喹啉部分的熒光強(qiáng)度隨氯離子濃度的增加而呈線性降低，丹磺酰胺部分的熒光強(qiáng)度保持不變，丹磺酰胺部分與6-甲氧基喹啉部分熒光強(qiáng)度的比值與氯離子濃度呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系�；谔结榩robe3良好的選擇性和靈敏度，我們成功將探針應(yīng)用到檢測細(xì)胞溶酶體內(nèi)氯離子變化水平。實(shí)驗(yàn)結(jié)果同時(shí)也表明連接基團(tuán)確實(shí)影響著探針的光學(xué)性質(zhì)，這為熒光比率型探針設(shè)計(jì)時(shí)選擇最佳的連接基團(tuán)提供了理論與實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)。 （二）設(shè)計(jì)合成了一種新型的同一激發(fā)不同發(fā)射的熒光比率型探針Cyb-Rhod-Tpy用于亞鐵離子的檢測。探針是將Cyb和Rhodamine通過共價(jià)鍵連接，并在Rhodamine上共價(jià)修飾對亞鐵離子響應(yīng)的三聯(lián)吡啶基團(tuán)。在同一激發(fā)下，Cyb-Rhodamine顯示兩個(gè)區(qū)分明顯的熒光發(fā)射峰，其中Rhodamine-Tpy隨著Fe~(2+)濃度的增加熒光強(qiáng)度線性降低，Cyb熒光保持不變作參比熒光，從而成功實(shí)現(xiàn)對亞鐵離子的熒光比率分析。
【關(guān)鍵詞】：熒光比率 連接基團(tuán) 同一激發(fā) 氯離子 亞鐵離子
【學(xué)位授予單位】：山東師范大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：O657.3
【目錄】：

• 摘要5-7
• Abstract7-9
• 第一章 緒論9-41
• 第一節(jié) 熒光比率探針的研究進(jìn)展9-23
• 第二節(jié) 氯離子熒光探針研究進(jìn)展23-29
• 第三節(jié) 鐵離子熒光探針研究進(jìn)展29-33
• 第四節(jié) 論文選題的目的與意義33-34
• 參考文獻(xiàn)34-41
• 第二章 定位于溶酶體檢測氯離子的新型同一激發(fā)不同發(fā)射熒光比率探針的設(shè)計(jì)、合成與應(yīng)用41-73
• 1. 引言41-42
• 2. 實(shí)驗(yàn)部分42-48
• 3. 結(jié)果和討論48-69
• 4. 結(jié)論69-70
• 參考文獻(xiàn)70-73
• 第三章 用于檢測亞鐵離子同一激發(fā)不同發(fā)射熒光比率探針的設(shè)計(jì)、合成與應(yīng)用73-82
• 1. 引言73-74
• 2. 實(shí)驗(yàn)部分74-77
• 3. 結(jié)果與討論77-79
• 4. 下一步工作計(jì)劃79-80
• 參考文獻(xiàn)80-82
• 附錄一 化合物的核磁共振、質(zhì)譜圖82-86
• 附錄二 碩士期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文及參加的課題86-87
• 致謝87

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 李靜;范大和;李紅波;袁淑軍;;水溶性汞離子熒光探針的研究新進(jìn)展[J];光譜實(shí)驗(yàn)室;2010年03期

2 吳|

本文編號：368625