目前,小分子熒光傳感器是化學(xué)、生命科學(xué)和臨床醫(yī)學(xué)等學(xué)科及其交叉學(xué)科的研究熱點(diǎn),這是因?yàn)樾》肿訜晒鈧鞲衅骶哂泻铣蛇^(guò)程簡(jiǎn)便、成本低廉、能實(shí)現(xiàn)識(shí)別手段多樣化等優(yōu)點(diǎn)。而且研究人員在利用生物熒光傳感器進(jìn)行測(cè)試過(guò)程中操作容易,樣品不需要進(jìn)行繁瑣的預(yù)處理,能對(duì)被檢測(cè)物進(jìn)行實(shí)時(shí)原位監(jiān)測(cè),同時(shí)可以很容易穿透細(xì)胞,可以實(shí)現(xiàn)對(duì)手術(shù)前后癌細(xì)胞和患癌組織進(jìn)行成像跟蹤,因此具有很好的生物應(yīng)用前景。本文通過(guò)設(shè)計(jì)合成兩種基于分子內(nèi)電荷轉(zhuǎn)移機(jī)制（ICT）的萘酰亞胺類(lèi)熒光探針,分別實(shí)現(xiàn)了對(duì)人體生物酶和小分子活性氮（RNS）的定量檢測(cè)。（1）我們通過(guò)合理設(shè)計(jì),合成了一種基于分子內(nèi)電荷轉(zhuǎn)移（ICT）機(jī)制的糜蛋白酶（CHT）熒光探針。該探針以1,8-萘酰亞胺作熒光母體,引入4-溴丁醜基構(gòu)建了比率熒光探針NI-1。4-溴丁酰基有著雙重功能:模擬多肽的底物識(shí)別糜蛋白酶和減弱熒光團(tuán)的ICT效應(yīng)。當(dāng)引入4-溴丁�；�,探針?lè)肿又械牧u基被保護(hù)起來(lái),減弱了 ICT效應(yīng),熒光發(fā)射在450 nm處,當(dāng)存在糜蛋白酶時(shí),酶催化裂解酯鍵,釋放出熒光團(tuán)上的羥基,熒光發(fā)射紅移至550 nm,發(fā)出強(qiáng)烈熒光,顯著改變了探針的光物理特性,具有較大的Stoke... 

【文章來(lái)源】：福州大學(xué)福建省 211工程院校

【文章頁(yè)數(shù)】：91 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖２－１?ＮＩ－ｌ與ＣＨＴ的光譜分析圖：（Ａ）在ｐＨ為８．０的ＨＥＰＥＳ緩沖溶液中，１０?ｎＭ的??ＮＩ－１與ＣＨＴ?（１０?ｎｇ／ｍＬ）于３０°Ｃ反應(yīng)３０?ｍｉｎ前（ａ）后（ｂ）的紫外光譜圖；（Ｂ）在ｐＨ??

Ｗａｖｅｌｅｎｇｔｈ?（ｎｍ）?Ｗａｖｅｌｅｎｇｔｈ?（ｎｍ）??圖２－２在ｐＨ＝８．０的ＨＥＰＥＳ緩沖溶液中，加入了?ＣＨＴ?（１０噸／ｍＬ）的體系中在３０°Ｃ下紫??夕卜（Ａ）和熒光（Ｂ）隨時(shí)間變化光譜。（、ｘ＝３８５ｎｍ，ｓｌｉｔ：?１０ｎｍ／１０ｎｍ，ＰＭＴＶｏｌｔｓ：５８０）??Ｆｉｇｕｒｅ?２－２?Ｔｉｍｅ－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ?ａｂｓｏｒｐｔｉｏｎ?（Ａ）?ａｎｄ?ｎｏｒｍａｌｉｚｅｄ?ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ?（Ｂ）?ｓｐｅｃｔｒａ?ｏｆ?ＮＩ－１?（１０??｜ｉＭ）?ｉｎ?ＨＥＰＥＳ?ｂｕｆｆｅｒ?（１００?ｍＭ，?ｐＨ?８．０）?ｕｐｏｎ?ａｄｄｉｔｉｏｎ?ｏｆ?ＣＨＴ?（１０?｜ｉｇ／ｍＬ）?ｏｖｅｒ?ｔｈｅ?ｃｏｕｒｓｅ?ｏｆ?３０??ｍｉｎ?ｕｎｄｅｒ?３０°Ｃ．?（＾ｅＸ＝?３８５?ｎｍ，?ｓｌｉｔ：?１０?ｎｍ／１０?ｎｍ，?ＰＭＴ?Ｖｏｌｔｓ：?５８０）??實(shí)驗(yàn)中考察了探針在加入ＣＨＴ前后的紫外和熒光光譜變化情況。Ｆｉｇｕｒｅ??２－２Ａ是加入ＣＨＴ?（１０?ｐｇ／ｍＬ）前后體系在３０?ｍｉｎ內(nèi)紫外光譜變化圖，從圖中可??以看出，反應(yīng)時(shí)間為０?ｍｉｎ時(shí)（加入ＣＨＴ前），在３５０?ｎｍ處有最大吸收峰。加??入ＣＨＴ之后，在４５０?ｎｍ處出現(xiàn)新的紫外吸收峰，與Ｆｉｇｕｒｅ?２－１實(shí)驗(yàn)測(cè)試得到??的紫外光譜結(jié)果一致。且隨著反應(yīng)時(shí)間的延長(zhǎng)，反應(yīng)體系在３５０?ｎｍ處吸收強(qiáng)?？??度逐漸減小

ｐＨ?Ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ?（°Ｃ）??圖２－３?（Ａ）不同ｐＨ的緩沖溶液和（Ｂ）不同溫度對(duì)ＮＩ－１?（１０?＿）本身（■）及對(duì)ＮＩ－１??（１０?ＭＭ）響應(yīng)ＯＮＯＯ＿?（１０?ｍＭ）?（?▲）的影響。結(jié)果表示為三次單獨(dú)測(cè)量的平均值土標(biāo)準(zhǔn)差。??Ｆｉｇｕｒｅ?２－３?Ｅｆｆｅｃｔｓ?ｏｆ?（Ａ）?ｐＨ?ａｎｄ?（Ｂ）?ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ?ｏｎ?ｔｈｅ?ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ?ｉｎｔｅｎｓｉｔｙ?ｒａｔｉｏ?ｏｆ?ＮＩ－１?（１０??｜ｉＭ）?ｗｉｔｈ?（▲）?ａｎｄ?ｗｉｔｈｏｕｔ?（■）?ＣＨＴ?（１０?｝ｉｇ／ｍＬ）．?Ｔｈｅ?ｒｅｓｕｌｔｓ?ａｒｅ?ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ?ａｓ?ｔｈｅ?ｍｅａｎ?土ｓｔａｎｄａｒｄ??ｄｅｖｉａｔｉｏｎ?ｏｆ?ｔｈｒｅｅ?ｓｅｐａｒａｔｅ?ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔｓ．?（＾ｃＸ＝?３８５?ｎｍ，?ｓｌｉｔ：?１０?ｎｍ／１０?ｎｍ，?ＰＭＴ?Ｖｏｌｔｓ：?５８０）．??熒光強(qiáng)度明顯增強(qiáng)；當(dāng)ｐＨ為８．０時(shí)，熒光強(qiáng)度比值出現(xiàn)最大值，說(shuō)明反應(yīng)在堿??性條件更適合，實(shí)驗(yàn)結(jié)果也符合糜蛋白酶本身的最適ｐＨ?７．５？９．０?［９１］。實(shí)驗(yàn)結(jié)果??表明探針ＮＩ－１能夠應(yīng)用在生理環(huán)境下檢測(cè)ＣＨＴ。所以ＨＥＰＥＳ緩沖溶液的ｐＨ為??８．０用于以后的實(shí)驗(yàn)中。??由Ｆｉｇｕｒｅ?２－３Ｂ可見(jiàn)，ＮＩ－１在５５０?ｎｍ和４５０?ｎｍ處焚光強(qiáng)度比值也是基本保??持在０．０１左右，說(shuō)明在探針在該溫度范圍內(nèi)有很好的穩(wěn)定性。向含有ＮＩ－１的反??應(yīng)體系中加入ＣＨＴ后，在２５？４５°Ｃ的溫度范圍內(nèi)，熒光明顯增強(qiáng)。選擇一個(gè)適??宜溫度作為反應(yīng)體系的溫度。因此

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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