本文關(guān)鍵詞：葡聚糖磁性微球的制備及固定化木瓜蛋白酶的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】： 天然高分子磁性微球是近20多年發(fā)展起來的一種新型多功能材料，并已在生物化工、細(xì)胞學(xué)、生物醫(yī)學(xué)工程等領(lǐng)域得到了廣泛應(yīng)用。其中，葡聚糖磁性微球由于其優(yōu)良的生物相容性和生物可溶性，骨架材料性質(zhì)穩(wěn)定，強(qiáng)度較高和無毒副作用等優(yōu)點(diǎn)而受到越來越多的關(guān)注。高分子葡聚糖上的活性基團(tuán)經(jīng)過表面修飾可以負(fù)載多種功能分子(酶、抗體、肽、DNA及RNA)，從而可制備多功能磁性復(fù)合物，作為新型的功能材料在酶的固定化、靶向藥物、細(xì)胞分離和免疫測(cè)定等領(lǐng)域得到了廣泛應(yīng)用。 (1)采用反相懸浮包埋技術(shù)，以納米鐵粉作磁核、環(huán)氧氯丙烷為交聯(lián)劑制備了葡聚糖磁性微球。用透射電鏡、原子力顯微鏡、激光粒度分布儀和紅外光譜儀等對(duì)其進(jìn)行形貌觀察和結(jié)構(gòu)表征，并測(cè)定了表面活性基團(tuán)的數(shù)量和對(duì)蛋白的吸附量。結(jié)果表明，制備的微球比表面積大，粒徑分布均勻，穩(wěn)定性和磁響應(yīng)性好，大小兩種粒徑的磁性微球(615nm和193nm)的表面活性基團(tuán)數(shù)分R%為9.23μmol／g(5.56×10~(15)個(gè)—OH／mg)和11.32μmol／g(6.81×10~(15)個(gè)—OH／mg)，吸附蛋白量為36.02mg／g(3.19×10~(14)個(gè)／mg)和53.62mg／g(4.75×10~(14)個(gè)／mg)，活性基團(tuán)數(shù)從理論上完全能滿足檢測(cè)要求，可用于細(xì)胞分離和免疫分析。 (2)以木瓜蛋白酶為模擬生物蛋白分子，利用共價(jià)結(jié)合法固定化木瓜蛋白酶，通過對(duì)比溶液酶和固定化酶的酶學(xué)性質(zhì)，考察了固定化過程對(duì)酶蛋白結(jié)構(gòu)和活性上的影響，為實(shí)際應(yīng)用提供參數(shù)。結(jié)果表明大小兩種粒徑的磁性微球(615nm和193nm)固定化酶后，酶蛋白載量分別為21.3mg／g和23.5mg／g，表觀米氏常數(shù)K_m~(app)分別為0.16mg／mL和0.12mg／mL，磁性固定化酶的最適溫度、熱穩(wěn)定性和貯存穩(wěn)定性等都明顯優(yōu)于溶液酶，溶液酶經(jīng)固定化后可連續(xù)重復(fù)使用提高利用效率，穩(wěn)定性得到提高。實(shí)驗(yàn)證明，木瓜蛋白酶固定在葡聚糖磁性微球上后，其活性中心沒有受到明顯影響，仍具有催化活性，，對(duì)變性劑的抵抗能力大為提高，我們認(rèn)為固定化能保持酶蛋白分子的生物活性，葡聚糖磁性微球可作為一種優(yōu)良的磁性載體材料用于細(xì)胞分離和免疫分析。
【關(guān)鍵詞】：葡聚糖磁性微球 木瓜蛋白酶 活性基團(tuán) 固定化 穩(wěn)定性
【學(xué)位授予單位】：華中師范大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2007
【分類號(hào)】：O631.3;O629.8
【目錄】：

• 摘要4-5
• Abstract5-9
• 第一章 緒論9-21
• 1.1 天然高分子磁性微球的研究進(jìn)展9-11
• 1.1.1 天然高分子磁性微球的制備9-10
• 1.1.2 天然高分子磁性微球的結(jié)構(gòu)和性質(zhì)10-11
• 1.2 天然高分子磁性微球的應(yīng)用11-15
• 1.2.1 靶向藥物11-12
• 1.2.2 細(xì)胞分離與免疫分析12-13
• 1.2.3 固定化酶13-14
• 1.2.4 廢水處理14-15
• 1.3 木瓜蛋白酶的研究進(jìn)展15-16
• 1.3.1 木瓜蛋白酶的一般理化性質(zhì)15
• 1.3.2 固定木瓜蛋白酶常用載體15-16
• 1.4 論文的選題思想及主要內(nèi)容16-18
• 參考文獻(xiàn)18-21
• 第二章 葡聚糖磁性微球的制備21-40
• 2.1 引言21-22
• 2.2 實(shí)驗(yàn)部分22-25
• 2.2.1 儀器與試劑22
• 2.2.2 葡聚糖磁性微球的制備22-23
• 2.2.3 葡聚糖磁性微球的表征23-24
• 2.2.4 葡聚糖磁性微球的修飾活化24-25
• 2.2.5 葡聚糖磁性微球的氧化活化25
• 2.2.6 葡聚糖磁性微球吸附蛋白實(shí)驗(yàn)25
• 2.3 結(jié)果與討論25-36
• 2.3.1 葡聚糖磁性微球的形貌觀察25-27
• 2.3.2 葡聚糖磁性微球的粒徑分布27-28
• 2.3.3 葡聚糖磁性微球的 Zeta 電位測(cè)定28
• 2.3.4 葡聚糖磁性微球與葡聚糖的紅外光譜28-29
• 2.3.5 葡聚糖磁性微球中的鐵含量測(cè)定29
• 2.3.6 葡聚糖磁性微球的磁響應(yīng)性29-30
• 2.3.7 葡聚糖磁性微球的耐酸性試驗(yàn)30
• 2.3.8 葡聚糖磁性微球表面活性基團(tuán)的測(cè)定30-33
• 2.3.9 葡聚糖磁性微球共價(jià)偶合蛋白量的測(cè)定33-35
• 2.3.10 葡聚糖磁性微球偶聯(lián)辛巴藍(lán)后對(duì) BSA 的吸附等溫線35-36
• 2.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)論36-38
• 參考文獻(xiàn)38-40
• 第三章 葡聚糖磁性微球固定化木瓜蛋白酶的研究40-62
• 3.1 前言40
• 3.2 實(shí)驗(yàn)部分40-45
• 3.2.1 儀器與試劑40-41
• 3.2.2 試劑的配制41
• 3.2.3 固定化酶的制備及酶蛋白載量的測(cè)定41-42
• 3.2.4 L-酪氨酸標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制42
• 3.2.5 木瓜蛋白酶的活力測(cè)定42-43
• 3.2.6 木瓜蛋白酶的酶學(xué)性質(zhì)試驗(yàn)43-45
• 3.3 結(jié)果與討論45-59
• 3.3.1 試驗(yàn)條件的選擇45
• 3.3.2 酪氨酸標(biāo)準(zhǔn)曲線45-46
• 3.3.3 木瓜蛋白酶固定化條件的確定46-51
• 3.3.4 磁性固定化木瓜蛋白酶的性質(zhì)51-59
• 3.4 結(jié)論59-61
• 參考文獻(xiàn)61-62
• 第四章 展望62-63
• 附錄63-64
• 致謝64

【引證文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 梅建鳳;黃婷婷;陳建澍;易喻;朱克寅;應(yīng)國(guó)清;;溫敏載體固定化木瓜蛋白酶的特性及其消化HCG抗體的應(yīng)用[J];藥物生物技術(shù);2013年03期

中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前2條

1 孫俊;功能性磁性納米顆粒的制備及其在食品體系中的應(yīng)用研究[D];江南大學(xué);2012年

2 姜春竹;微萃取技術(shù)在環(huán)境和藥物樣品處理中的應(yīng)用[D];吉林大學(xué);2013年

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前5條

1 唐雪珍;微米級(jí)親和凝膠載體的制備及其親和吸附蛋白質(zhì)研究[D];華東理工大學(xué);2011年

2 張麗萍;多孔殼聚糖磁性微球的制備及對(duì)固定化木聚糖酶的研究[D];湖北師范學(xué)院;2011年

3 沈龍燕;親和磁性微載體的制備及吸附性能的研究[D];華東理工大學(xué);2012年

4 李小龍;磁性高分子微球的制備及其應(yīng)用[D];湖北大學(xué);2012年

5 唐榮華;京尼平交聯(lián)磁性殼聚糖微球的制備及酶的固定化[D];湖南師范大學(xué);2013年

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本文編號(hào)：333060