酪氨酸酶（TYR）作為含銅氧化酶,可催化酪胺或酪氨酸氧化為多巴胺（DA）,并進一步氧化為多巴醌,從而引發(fā)黑色素的形成。黑色素在黑色素瘤的發(fā)展中起關鍵作用,且與多種疾病的診斷有重要關系。此外,DA作為重要的兒茶酚胺神經遞質,在人體的多種組織中起重要作用。同時堿性磷酸酶（ALP）在很多病例中也發(fā)揮重要作用,其酶含量的異常水平可引起或預示很多疾病。因此,開發(fā)一種簡單、迅速且靈敏的DA、TYR和ALP的新探測方法是非常重要的。本文采用熒光檢測的方法,首先基于TYR對酚胺類物質的特異性反應,引入氧化劑來加速反應構建了一種簡便且靈敏的DA和TYR檢測方法。其次,構建了基于香豆素衍生物的TYR檢測熒光探針和可發(fā)生ALP和TYR酶級聯反應的新型近紅外熒光探針。主要研究內容如下:（1）利用過氧化苯甲酰促進間苯二酚和DA之間的原位熒光反應,建立了簡單、經濟、高效、高選擇性和高靈敏的DA濃度和TYR活性測定方法。將過氧化苯甲酰引入系統可促進DA氧化,從而實現與間苯二酚的更快反應以形成熒光物質。該測定法能夠測量未標記的熒光讀數,并且產物的熒光強度信號取決于DA的濃度和TYR的活性。在測定DA時,其濃度在4.0... 

【文章來源】：西北大學陜西省 211工程院校

【文章頁數】：95 頁

【學位級別】：碩士

【圖文】：

利用熒光g-C3N4納米片檢測ALP的無標記熒光分析的示意圖

西北大學碩士學位論文4反應的進行，4-氨基萘酰亞胺在535nm處開始釋放，而在467nm處由于氨基甲酸鍵的作用而逐漸熄滅（如圖1.2）。因此，合成的探針顯示比率熒光變化，用于TYR活性的定量分析[38]。圖1.2TYR檢測策略示意圖1.3.3熒光共振能量轉移(FRET)熒光共振能量轉移是基于供體的激發(fā)態(tài)能量轉移到具有較低能量激發(fā)態(tài)的受體的能力，前提是有一個匹配的受體激發(fā)態(tài)振動能級可用[37]。通常，只有當供體的發(fā)射光譜和受體的吸收光譜明顯重疊，且供體和受體的相互距離足夠近（1-10nm）時，才可能發(fā)生有效的FRET過程[39]。作為簡單的熒光分析技術，FRET對分子間距離的納米級變化非常敏感，適合于研究生物分子間的相互作用和構象變化，因而受到越來越多的關注[40]。Yang等人以F-PDA納米粒為熒光供體，MnO2納米粒為熒光受體形成FRET對，MnO2納米粒以指數衰減的形式有效地猝滅了F-PDA納米粒的熒光。同時，ALP能催化2-磷酸-L-抗壞血酸（AA2P）水解生成L-抗壞血酸（AA），使MnO2還原為Mn2+，并引發(fā)MnO2納米片的分解，同時使F-PDA納米顆粒熒光恢復（如圖1.3），實現了無標記、低成本、直觀且特異的ALP檢測[41]。圖1.3基于FRET的ALP檢測用F-PDA-MnO2探針示意圖

西北大學碩士學位論文4反應的進行，4-氨基萘酰亞胺在535nm處開始釋放，而在467nm處由于氨基甲酸鍵的作用而逐漸熄滅（如圖1.2）。因此，合成的探針顯示比率熒光變化，用于TYR活性的定量分析[38]。圖1.2TYR檢測策略示意圖1.3.3熒光共振能量轉移(FRET)熒光共振能量轉移是基于供體的激發(fā)態(tài)能量轉移到具有較低能量激發(fā)態(tài)的受體的能力，前提是有一個匹配的受體激發(fā)態(tài)振動能級可用[37]。通常，只有當供體的發(fā)射光譜和受體的吸收光譜明顯重疊，且供體和受體的相互距離足夠近（1-10nm）時，才可能發(fā)生有效的FRET過程[39]。作為簡單的熒光分析技術，FRET對分子間距離的納米級變化非常敏感，適合于研究生物分子間的相互作用和構象變化，因而受到越來越多的關注[40]。Yang等人以F-PDA納米粒為熒光供體，MnO2納米粒為熒光受體形成FRET對，MnO2納米粒以指數衰減的形式有效地猝滅了F-PDA納米粒的熒光。同時，ALP能催化2-磷酸-L-抗壞血酸（AA2P）水解生成L-抗壞血酸（AA），使MnO2還原為Mn2+，并引發(fā)MnO2納米片的分解，同時使F-PDA納米顆粒熒光恢復（如圖1.3），實現了無標記、低成本、直觀且特異的ALP檢測[41]。圖1.3基于FRET的ALP檢測用F-PDA-MnO2探針示意圖

【參考文獻】：
期刊論文
[1]FRET-based ratiometric fluorescent detection of arginine in mitochondrion with a hybrid nanoprobe[J]. Yueyue Li,Yanan Ban,Ruihui Wang,Zheng Wang,Zhanxian Li,Chenjie Fang,Mingming Yu.  Chinese Chemical Letters. 2020(02)
[2]長光程薄層紫外-可見光譜電化學法測定多巴胺[J]. 吳霖生,崔華,晉冠平,林祥欽.  分析化學. 2000(05)



本文編號：3310961