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核酸適配體應(yīng)用于環(huán)丙氨嗪快速檢測(cè)新方法研究

發(fā)布時(shí)間:2021-03-27 00:04
  環(huán)丙氨嗪是一種三嗪類化合物,作為飼料添加劑被廣泛應(yīng)用于畜牧養(yǎng)殖業(yè)。它在環(huán)境中具有遷移性,可以進(jìn)入人體內(nèi),對(duì)人體健康產(chǎn)生影響。環(huán)丙氨嗪在動(dòng)物和植物體內(nèi)可通過(guò)脫烷基作用代謝為三聚氰胺,長(zhǎng)期攝入三聚氰胺會(huì)導(dǎo)致腎結(jié)石和腎衰竭。2008年毒奶粉事件后三聚氰胺被廣泛關(guān)注,然而大眾忽略了對(duì)三聚氰胺的代謝原藥環(huán)丙氨嗪的關(guān)注。隨著政府后續(xù)對(duì)奶制品檢測(cè)范圍的擴(kuò)大,環(huán)丙氨嗪才逐漸進(jìn)入了人們的視線。如今,在牛奶出廠前都要按照國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)嚴(yán)格的檢測(cè)牛奶中環(huán)丙氨嗪和三聚氰胺的殘留量,而出廠前牛奶數(shù)量眾多,因此如何在出廠前快速檢測(cè)牛奶中的環(huán)丙氨嗪已成為熱門(mén)話題。傳統(tǒng)的環(huán)丙氨嗪檢測(cè)方法包括高效液相色譜法、氣相色譜質(zhì)譜法等,由于其步驟繁瑣、檢測(cè)費(fèi)用高等原因不適用于現(xiàn)場(chǎng)快速檢測(cè)。因此研究建立高效、快速、經(jīng)濟(jì)的檢測(cè)方法檢測(cè)環(huán)丙氨嗪具有重要的理論價(jià)值和實(shí)用意義。核酸適配體制備方法十分簡(jiǎn)易,不易降解,并且標(biāo)記方法多種多樣,因而本研究以核酸適配體為基礎(chǔ),選擇不同的信號(hào)輸出技術(shù)開(kāi)發(fā)出了三種快速檢測(cè)牛奶中環(huán)丙氨嗪的方法;诃h(huán)丙氨嗪特異性核酸適配體和熒光淬滅開(kāi)發(fā)出了一種快速檢測(cè)牛奶中環(huán)丙氨嗪的方法。當(dāng)用FAM標(biāo)記的富含G的特異性核酸適配... 

【文章來(lái)源】:上海應(yīng)用技術(shù)大學(xué)上海市

【文章頁(yè)數(shù)】:70 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】:碩士

【部分圖文】:

核酸適配體應(yīng)用于環(huán)丙氨嗪快速檢測(cè)新方法研究


環(huán)丙氨嗪結(jié)構(gòu)式Fig1.1StructuralformulaofCyromazine

示意圖,技術(shù),示意圖,靶標(biāo)


機(jī)單鏈序列文庫(kù),然后將靶標(biāo)加入到該隨機(jī)序列文庫(kù)中,使靶標(biāo)與隨機(jī)序列文庫(kù)中的序列通過(guò)氫鍵、范德華力和空間構(gòu)象等進(jìn)行相互作用,結(jié)合成較為穩(wěn)定的核苷酸-靶標(biāo)復(fù)合物;在第1輪篩選后,洗脫掉未與靶標(biāo)結(jié)合的隨機(jī)序列,留下能與靶標(biāo)穩(wěn)定結(jié)合的核酸序列,并以此核酸分子為模板進(jìn)行PCR擴(kuò)增,進(jìn)行下一輪的篩選過(guò)程[85]。依照此篩選流程進(jìn)行反復(fù)篩選擴(kuò)增,直到得到能與靶標(biāo)進(jìn)行特異性結(jié)合的適配體序列。將最后得到的適配體序列進(jìn)行PCR擴(kuò)增并送到生物公司進(jìn)行純化和克隆測(cè)序,然后對(duì)該適配體進(jìn)行解離常數(shù)測(cè)定和和特異性檢驗(yàn)。圖1.2SELEX篩選技術(shù)示意圖[86]Fig1.2DiagramfortheSELEXenrichment1.3.2適配體在檢測(cè)中的應(yīng)用由于核酸適配體具有具有高特異性、高親和力、制備簡(jiǎn)單、合成成本低等優(yōu)點(diǎn),其

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