熒光探針技術(shù)由于操作簡單,成本低及檢測快速等優(yōu)點,在各類核酸目標物的檢測中應(yīng)用。然而,待測目標物的含量往往很低,需要通過擴增技術(shù),以實現(xiàn)高靈敏的測定。信號放大擴增策略通過分子擴增技術(shù),可以用來檢測酶活性、核酸和單堿基錯配等多種物質(zhì),而DNA鏈置換反應(yīng)就是信號放大的新機理之一。堿基錯配的特異性識別,為疾病的診斷及治療提供了重要的依據(jù),若能夠開發(fā)出對單個堿基錯配具有特異性識別的探針,那將對醫(yī)學(xué)界的疾病診斷提供一定的幫助。在本論文中,我們利用協(xié)同反應(yīng)設(shè)計了一種信號放大的DNA鏈置換開關(guān),構(gòu)建了DNA堿基錯配識別的探針,用于寡核苷酸和單堿基錯配的識別。通過熒光和聚丙烯酰胺凝膠電泳驗證了該探針的可行性與重現(xiàn)性。具體研究內(nèi)容如下:（1）基于雙目標響應(yīng)的DNA鏈置換開關(guān)的研究:本章節(jié)利用協(xié)同反應(yīng),設(shè)計了一種基于雙目標響應(yīng)的DNA鏈置換開關(guān)。其原理是兩條低濃度且序列不同的目標鏈,共同作用于探針的兩端支點;然后發(fā)生協(xié)同雜交鏈置換反應(yīng),并釋放出下一步鏈置換反應(yīng)的支點域。通過熒光和凝膠電泳的表征手段,驗證了該方法具有良好的可行性與重現(xiàn)性。我們對寡核苷酸不同支點長度的調(diào)節(jié),驗證了協(xié)同反應(yīng)的可調(diào)控性,并表現(xiàn)出不... 

【文章來源】：湘潭大學(xué)湖南省

【文章頁數(shù)】：70 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
第1章 緒論
    1.1 單堿基錯配
        1.1.1 單核苷酸多態(tài)性的產(chǎn)生
        1.1.2 單核苷酸多態(tài)性作為基因分型的原因
        1.1.3 單核苷酸多態(tài)性的方法與分類
        1.1.4 用單核苷酸多態(tài)性進行檢測的方法
        1.1.5 單核苷酸多態(tài)性基因分型的應(yīng)用
    1.2 鏈置換反應(yīng)的原理及應(yīng)用
        1.2.1 DNA和 RNA的檢測
        1.2.2 蛋白質(zhì)的檢測
    1.3 DNA鏈置換信號循環(huán)放大的技術(shù)
        1.3.1 雜交鏈反應(yīng)放大技術(shù)
        1.3.2 HCR實時監(jiān)測
    1.4 選題思路及研究內(nèi)容
第2章 基于雙目標響應(yīng)的DNA鏈置換開關(guān)的研究
    2.1 前言
    2.2 實驗部分
        2.2.1 儀器與試劑
        2.2.2 熒光光譜測量
        2.2.3 非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳
    2.3 結(jié)果與討論
        2.3.1 雙目標驅(qū)動的信號循環(huán)放大反應(yīng)機理
        2.3.2 合作支點雜交機制
        2.3.3 單邊循環(huán)信號放大原理
    2.4 小結(jié)
第3章 基于雙目標響應(yīng)的DNA堿基錯配的研究
    3.1 前言
    3.2 實驗部分
        3.2.1 儀器與試劑
        3.2.2 熒光檢測
        3.2.3 非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳
    3.3 結(jié)果與討論
        3.3.1 實驗原理
        3.3.2 聚丙烯酰胺凝膠電泳驗證機理
        3.3.3 探針比列的實時優(yōu)化
        3.3.4 DNA目標鏈的濃度梯度實時監(jiān)測
        3.3.5 不同堿基錯配的熒光光譜測量
        3.3.6 DNA堿基錯配的實時熒光監(jiān)測
    3.4 小結(jié)
結(jié)論
參考文獻
致謝
個人簡歷及在校期間發(fā)表的論文



本文編號：3048972