發(fā)布時(shí)間：2020-10-17 03:00

　　 近年來(lái),人們對(duì)研究藥物小分子與蛋白質(zhì)大分子之間的相互作用越來(lái)越重視。本論文分別以頭孢吡肟、頭孢哌酮鈉、頭孢尼西鈉、硫酸頭孢匹羅四種藥物和木瓜蛋白酶為研究主體,利用熒光光譜法和同步熒光光譜法對(duì)藥物-木瓜蛋白酶體系進(jìn)行了研究。研究?jī)?nèi)容共分以下幾部分:第一章:綜述了木瓜蛋白酶的性質(zhì)和用途,并對(duì)熒光光譜法和同步熒光光譜法結(jié)合藥物-蛋白質(zhì)體系進(jìn)行了闡述與說(shuō)明。第二章:采用熒光猝滅法和同步熒光法研究了頭孢吡肟(CEF)與木瓜蛋白酶(PAPA)在不同溫度下的相互作用。結(jié)果表明,CEF能夠有效猝滅PAPA的內(nèi)源熒光,該猝滅過(guò)程為靜態(tài)猝滅過(guò)程。靜電相互作用力是CEF與PAPA間結(jié)合的主要作用力,結(jié)合常數(shù)在10~4數(shù)量級(jí),其結(jié)合比為1:1且該結(jié)合表現(xiàn)為零協(xié)同作用。兩種方法所得結(jié)論一致。同步熒光法研究表明PAPA的色氨酸(Trp)殘基和酪氨酸(Tyr)殘基都參與了CEF與PAPA的結(jié)合反應(yīng),由激發(fā)波長(zhǎng)280 nm數(shù)據(jù)得到了該結(jié)合反應(yīng)的結(jié)合率及結(jié)合模型。同時(shí)在318 K下,體系熒光強(qiáng)度與CEF濃度在6.0×10~(-6)~7.0×10~-55 mol/L范圍內(nèi)呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系,檢出限為3.78×10~-66 mol/L(n=10)。表明利用CEF對(duì)PAPA的熒光猝滅反應(yīng),可以實(shí)現(xiàn)對(duì)實(shí)際藥品中CEF含量的快速測(cè)定。第三章:以PAPA為檢測(cè)對(duì)象,采用熒光光譜法和同步熒光光譜法分別研究了三個(gè)溫度下頭孢哌酮鈉(CFZ)與PAPA間的結(jié)合行為。結(jié)果表明:CFZ對(duì)PAPA的熒光及CFZ對(duì)PAPA的Trp和Tyr殘基的熒光都是以靜態(tài)猝滅的方式猝滅;同時(shí)得到了它們之間的結(jié)合常數(shù)(K_a)、結(jié)合位點(diǎn)(n)、熱力學(xué)參數(shù)、結(jié)合力類型、Hill系數(shù)等參數(shù)。同步熒光光譜還表明,CFZ與PAPA的結(jié)合能夠改變PAPA的構(gòu)象,同時(shí)PAPA的Trp和Tyr殘基均參與了該結(jié)合反應(yīng),通過(guò)計(jì)算得到了PAPA的Trp和Tyr殘基的熒光猝滅比率份數(shù)。此外,由激發(fā)波長(zhǎng)295 nm數(shù)據(jù)求得了該結(jié)合反應(yīng)的結(jié)合率及結(jié)合模型。在293 K時(shí)體系熒光強(qiáng)度與CFZ濃度在4.0×10~(-6)~1.0×10~-44 mol/L范圍內(nèi)有良好的線性關(guān)系,方法的檢出限為2.43×10~-66 mol/L(n=10)。表明可以利用該反應(yīng)實(shí)現(xiàn)實(shí)際藥品中CFZ含量的快速測(cè)定。第四章:利用熒光光譜法和同步熒光光譜法研究頭孢尼西鈉(CFS)與PAPA的相互作用。結(jié)果表明:CFS使PAPA的熒光發(fā)生猝滅,其猝滅機(jī)制為靜態(tài)猝滅;CFS與PAPA的結(jié)合位點(diǎn)為1,該結(jié)合具有零協(xié)同作用,CFS與PAPA之間為靜電引力作用等,熒光猝滅法和同步熒光法得的結(jié)論相同。同步熒光光譜研究表明,CFS與PAPA的結(jié)合能夠改變PAPA的構(gòu)象,同時(shí)PAPA的Trp和Tyr殘基均參與了該結(jié)合反應(yīng),通過(guò)計(jì)算得到了PAPA的Trp和Tyr殘基的熒光猝滅比率份數(shù)和該結(jié)合反應(yīng)的結(jié)合率及結(jié)合模型。同時(shí)在293 K時(shí)體系熒光強(qiáng)度與CFS濃度在6.0×10~(-6)~1.0×10~-44 mol/L范圍內(nèi)有良好的線性關(guān)系,方法的檢出限為3.05×10~-66 mol/L(n=10)。表明利用該反應(yīng)能夠?qū)崿F(xiàn)對(duì)實(shí)際藥品中CFS含量的快速測(cè)定。第五章:以PAPA為檢測(cè)對(duì)象,通過(guò)熒光猝滅光譜和同步熒光光譜研究硫酸頭孢匹羅(CPS)與PAPA的相互作用。計(jì)算得到了不同溫度下CPS與PAPA及CPS與PAPA的Trp和Tyr殘基的結(jié)合常數(shù)、結(jié)合位點(diǎn)數(shù)、猝滅類型、作用力及協(xié)同性等參數(shù),兩種方法所得結(jié)論相同。同時(shí)同步熒光光譜表明,CPS與PAPA的結(jié)合將改變PAPA的構(gòu)象,PAPA的Trp和Tyr殘基均參與了該結(jié)合反應(yīng),求得了PAPA的Trp和Tyr殘基的熒光猝滅比率份數(shù)及該反應(yīng)的結(jié)合率及結(jié)合模型。該研究對(duì)于臨床用藥具有一定的指導(dǎo)意義。
【學(xué)位單位】：河北大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：O657.3;TQ460.1
【部分圖文】：

簡(jiǎn)稱 CEF)分子結(jié)構(gòu)式見(jiàn)圖 2-1，是第四代頭菌和革蘭陰性菌，包括金銅綠假單胞菌、綠膿桿菌等。疾病，如酒精性肺炎，發(fā)熱性中性粒細(xì)胞減少癥，皮究 CEF 與 PAPA 的相互作用尚未進(jìn)行。由于 PAPA 在CEF 與 PAPA 之間的相互作用是值得進(jìn)行的。它將深，為更好地理解藥物與 PAPA 結(jié)合的機(jī)理提供必要的光光譜可以研究不同溫度條件下藥物與蛋白之間的相數(shù)、結(jié)合位點(diǎn)的數(shù)量、結(jié)合力的性質(zhì)以及藥物-蛋白質(zhì)[39]。藥物與蛋白結(jié)合率、結(jié)合模型、Trp 及 Tyr 殘基的了解藥物的藥效學(xué)和藥代動(dòng)力學(xué)行為以及設(shè)計(jì)具有有的意義。

圖 2-2 CEF-PAPA 的熒光發(fā)射光譜 (T=293 K, λex=280 nm). 2-2 Fluorescence emission spectra of CEF-PAPA(T=293 K, λex=280-6mol/L, 1~12: CCEF= (0, 0.4, 0.6, 2.0, 3.0, 4.0, 6.0, 7.0, 8.0, 10, 14, Stern-Volmer 方程[42](2-2)處理：1[]1[]1[]00IIKLKLKLqsvD (2-2)別表示不存在和存在猝滅劑(CEF)時(shí)的穩(wěn)態(tài)熒光強(qiáng)度，tern-Volmer 靜態(tài)猝滅常數(shù)，KD是動(dòng)態(tài)猝滅常數(shù)，τ0為不命[43](約為 10-8s)，[L]是猝滅劑的濃度。利用公式(2-2)，回歸來(lái)確定 Ksv，計(jì)算出的 Ksv和 Kq值列于表 2-1 中。由Kq值均遠(yuǎn)大于最大散射碰撞猝滅常數(shù)(2.0×1010L·mol-1·s-1光猝滅是一個(gè)靜態(tài)猝滅過(guò)程；另外，表 2-1 數(shù)據(jù)顯示 K，進(jìn)一步表明 CEF-PAPA 結(jié)合反應(yīng)的猝滅機(jī)理是生成了

河北大學(xué)理學(xué)碩士學(xué)位論文加入不同濃度的CEF，PAPA的Tyr和Trp殘基的同步熒光光譜如圖2-3所示。從圖中可以得出，CEF的添加導(dǎo)致PAPA的Tyr和Trp殘基的熒光強(qiáng)度有規(guī)律地降低，不同的是，Δλ=15 nm的峰位發(fā)生了明顯的紅移現(xiàn)象，Δλ=60 nm沒(méi)有發(fā)生紅移現(xiàn)象。表明Tyr殘基附近的極性增加，疏水性減小，最終使得肽鏈變松散，改變了PAPA的構(gòu)象。
【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2844169