發(fā)布時(shí)間：2019-11-25 14:41

【摘要】：為了提高漆酶的穩(wěn)定性,研究了甘油、肌醇和山梨醇3種添加劑對(duì)漆酶酸堿穩(wěn)定性的影響,并通過(guò)紫外光譜、熒光光譜和圓二色譜分析了添加劑對(duì)漆酶的保護(hù)機(jī)理。研究表明,添加劑對(duì)漆酶的保護(hù)效果與添加劑的種類和濃度有關(guān)。在p H 3的緩沖液中,當(dāng)肌醇的濃度為0.2 mol/L時(shí)漆酶的相對(duì)酶活達(dá)到最大值(125%),當(dāng)甘油或山梨醇濃度增加時(shí),漆酶的相對(duì)酶活逐漸增大;當(dāng)添加的濃度相同時(shí),甘油對(duì)漆酶的保護(hù)效果強(qiáng)于山梨醇,當(dāng)添加的濃度為0.6 mol/L時(shí),甘油使漆酶相對(duì)酶活提高了29%,山梨醇使漆酶相對(duì)酶活提高了15%。漆酶適宜的p H值范圍為2~5,加入添加劑后提高了漆酶的酸堿穩(wěn)定性。通過(guò)光譜分析可知,通過(guò)與漆酶分子間形成氫鍵,甘油、肌醇和山梨醇可以提高漆酶在溶液中的酸堿穩(wěn)定性。
【圖文】：

研究報(bào)告2017年第43卷第12期(總第360期)21啟動(dòng)反應(yīng)，測(cè)定3min內(nèi)在420nm處反應(yīng)液的吸光度值的變化，以每分鐘轉(zhuǎn)化1μmol底物定義為1個(gè)酶活力單位(U)。2結(jié)果與分析2.1不同濃度的添加劑對(duì)漆酶酶活的影響為了便于研究添加劑對(duì)漆酶酸堿穩(wěn)定性的影響，首先考察添加劑濃度對(duì)漆酶酶活的影響，確定添加劑的適宜濃度。在pH3的漆酶溶液中加入不同濃度的添加劑，測(cè)定其酶活并與未加添加劑的漆酶溶液比較，計(jì)算漆酶的相對(duì)酶活。從圖1可知，隨著肌醇濃度的增加，漆酶的相對(duì)酶活先增大后減校當(dāng)肌醇的濃度達(dá)到0.2mol/L時(shí)，，漆酶的相對(duì)酶活達(dá)到最大，故肌醇的適宜濃度為0.2mol/L。加入過(guò)量的肌醇，漆酶的活性反而降低，這可能是由于過(guò)量的肌醇會(huì)阻礙漆酶與ABTS結(jié)合，進(jìn)而使酶活性降低。劉彩琴［9］等人的研究結(jié)果也表明加入過(guò)多的添加劑會(huì)使酶活性下降。添加甘油和山梨醇的相對(duì)酶活曲線較為相似，都是隨著濃度的上升，漆酶的相對(duì)酶活逐漸增大，當(dāng)添加的濃度相同時(shí)加入甘油后漆酶的相對(duì)酶活大于加入山梨醇，說(shuō)明甘油的效果強(qiáng)于山梨醇。當(dāng)甘油或山梨醇的添加量達(dá)到0.6mol/L時(shí)，加入甘油時(shí)漆酶相對(duì)酶活提高了29%，加入山梨醇后提高了15%。在考察的濃度范圍內(nèi)由于甘油和山梨醇的相對(duì)酶活曲線沒(méi)有出現(xiàn)極值，因此我們以0.6mol/L作為甘油和山梨醇的適宜濃度，考察其對(duì)漆酶的保護(hù)效果。從圖1我們還可看出，添加劑對(duì)漆酶的保護(hù)效果與添加劑的類型和濃度有關(guān)，因此選擇合適的添加劑及其適宜的濃度對(duì)其在實(shí)際中的應(yīng)用具有十分重要的意義。圖1加入添加劑后漆酶的相對(duì)酶活Fig．1Therelativeenzymeactivityoflaccaseafteraddingadditives2.2添加劑對(duì)漆酶的酸堿穩(wěn)定性的影響從圖2可知，隨著溶液pH值的升高，漆酶的相對(duì)酶活先增大后減小，在溶液pH3

奶砑恿看?到0.6mol/L時(shí)，加入甘油時(shí)漆酶相對(duì)酶活提高了29%，加入山梨醇后提高了15%。在考察的濃度范圍內(nèi)由于甘油和山梨醇的相對(duì)酶活曲線沒(méi)有出現(xiàn)極值，因此我們以0.6mol/L作為甘油和山梨醇的適宜濃度，考察其對(duì)漆酶的保護(hù)效果。從圖1我們還可看出，添加劑對(duì)漆酶的保護(hù)效果與添加劑的類型和濃度有關(guān)，因此選擇合適的添加劑及其適宜的濃度對(duì)其在實(shí)際中的應(yīng)用具有十分重要的意義。圖1加入添加劑后漆酶的相對(duì)酶活Fig．1Therelativeenzymeactivityoflaccaseafteraddingadditives2.2添加劑對(duì)漆酶的酸堿穩(wěn)定性的影響從圖2可知，隨著溶液pH值的升高，漆酶的相對(duì)酶活先增大后減小，在溶液pH3時(shí)漆酶的相對(duì)酶活達(dá)到最大值。漆酶的相對(duì)酶活在緩沖液pH2～5時(shí)都維持在了100%以上，可以看出其適宜的pH值范圍應(yīng)該在pH2～5。當(dāng)溶液為pH2～3時(shí)，加入甘油對(duì)漆酶的保護(hù)效果要好于山梨醇或肌醇，而在pH4的溶液中加入山梨醇后漆酶的相對(duì)酶活高于甘油或肌醇。總的來(lái)說(shuō)甘油的保護(hù)效果要好于山梨醇和肌醇，在pH2和3的溶液中能使漆酶的相對(duì)酶活分別提高53%和120%。當(dāng)溶液pH＞5時(shí)漆酶的酶活下降較快，加入添加劑對(duì)漆酶的保護(hù)效果不明顯。在pH6的漆酶溶液中，加入添加劑后漆酶的相對(duì)酶活提高了不到10%。添加劑對(duì)漆酶的保護(hù)效果與漆酶的適宜pH值范圍有關(guān)，當(dāng)溶液pH值超過(guò)其適宜范圍時(shí)，添加劑對(duì)漆酶的保護(hù)效果下降。從圖2不難看出，添加劑可以提高漆酶在不同pH值溶液中的相對(duì)酶活，添加劑增強(qiáng)了漆酶的酸堿穩(wěn)定性。圖2加入添加劑后漆酶在不同pH溶液中的酶活Fig．2EnzymeactivityoflaccaseafteraddingadditivesindifferentpHsolutions2.3添加劑對(duì)漆酶的保護(hù)機(jī)理2.3.1漆酶的紫外光譜分析蛋白質(zhì)的紫外光譜有190～220nm和250～300nm兩個(gè)吸收峰區(qū)［10

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