【摘要】：將離子液體2,5-二羥基苯甲酸丁胺用于改進(jìn)基質(zhì)輔助激光解吸電離質(zhì)譜分析寡糖的定量重復(fù)性,并進(jìn)一步用于大豆和豆葉中寡糖的質(zhì)譜成像研究。實(shí)驗(yàn)中設(shè)定正電荷檢測(cè)模式、激光能量為70%,采用將離子液體2,5-二羥基苯甲酸丁胺甲醇溶液(20%,V/V)直接覆蓋樣品的簡單加基質(zhì)方法,分析寡糖樣品及大豆和豆葉寡糖分布的質(zhì)譜成像。結(jié)果表明,離子液體2,5-二羥基苯甲酸丁胺作為基質(zhì),用基質(zhì)輔助激光解吸電離化質(zhì)譜分析蔗糖、棉子糖、水蘇糖3種寡糖樣品,點(diǎn)內(nèi)重復(fù)性RSD3%,點(diǎn)間重復(fù)性RSD4%,在0.062～1.00 mg/m L范圍內(nèi)測(cè)定的線性相關(guān)系數(shù)R~2≥0.996,顯示出較好的定量分析潛力。將此基質(zhì)用于基質(zhì)輔助激光解吸電離質(zhì)譜成像分析大豆切片和豆葉表面的二糖、三糖和四糖,得到空間分辨率為150μm的3種寡糖質(zhì)譜成像圖。3種寡糖在大豆中大致均衡分布,在豆葉的分布均以葉尖為多,并且根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線和圖中的信號(hào)強(qiáng)度可以估計(jì)其含量。
【圖文】：

軟件中設(shè)置采集參數(shù)見表1。成像結(jié)果由HystarVersion3．4(Build8))軟件處理得到。圖1大豆成像的過程示意圖Fig．1Illustrationdiagramofsoybeanmatrix-assistedlaserdesorption/ionizationmassspectrometry(MALDI-MS)imaging表1實(shí)驗(yàn)中基質(zhì)輔助激光解吸-質(zhì)譜分析主要參數(shù)Table1Parameterofmatrix-assistedlaserdesorption/ionizationmassspectrometryandimagingintheexperimentMS采集參數(shù)Acquisitionparameters分析模式Acquisitionmode最低分子量Broadbandlowmass激光能量Laserpower基質(zhì)輔助激光解吸離子化MALDIm/z101．170%極性Polarity分辨率Ｒesolution激光斑點(diǎn)大小LaserFocus正離子Positive逍逍逍逍逍逍2M小Small成像采集參數(shù)Imagingacquisitionparameters步長Ｒasterwidth150μm分辨率Ｒesolution1M3結(jié)果與討論3．1MALDI-MS實(shí)驗(yàn)條件的影響選用葡萄糖(單糖)、蔗糖(二糖)、棉子糖(三糖)、水蘇糖(四糖)、β-環(huán)糊精(七糖)作為寡糖樣品。樣品濃度均為0．5mg/mL。考察了不同基質(zhì)類型、基質(zhì)溶液濃度、基質(zhì)溶液與樣品溶液用量比、激光能量、點(diǎn)樣方法等對(duì)測(cè)試的影響。用2，5-二羥基苯甲酸(DHB)分別與吡啶、苯胺、N，N-二甲基苯胺、正丁胺合成了4種離子液體基質(zhì)。用于3種寡糖樣品測(cè)定時(shí)均有響應(yīng)，其中DHB與正丁胺形成的離子液體DHB-BuN作為基質(zhì)對(duì)3種寡糖的響應(yīng)均較好。因此，選擇DHB-BuN作為進(jìn)一步研究的基質(zhì)。考察DHB-BuN甲醇溶液濃度分別在14%～50%(V/V)時(shí)的MALDI-MS點(diǎn)樣效果，，在DHB-BuN濃度低于20%(V/V)時(shí)，溶液在靶板上能均勻鋪展，不易聚集，得到均勻且薄的基質(zhì)點(diǎn)。但降低濃度，信噪比也會(huì)下降。故DHB-BuN甲醇溶液濃度選擇20%(V/V)。以蔗糖為樣品，考察在基質(zhì)溶液與樣品溶液的用量(DHB-BuN∶蔗糖)分

仗欠直鷯牖馇駛?合，在以上MALDI-MS條件下，分別用離子液體基質(zhì)DHB-BuN和固體基質(zhì)DHB測(cè)試樣品，比較兩者的重復(fù)性。在比較點(diǎn)內(nèi)(In-spot)重復(fù)性時(shí)，按照九宮格的形式，將1個(gè)點(diǎn)分成大致9個(gè)區(qū)域，然后手動(dòng)將激光束聚焦在每個(gè)區(qū)域的位置上，采集質(zhì)譜數(shù)據(jù)。選擇［M+Na］+峰為重復(fù)性數(shù)據(jù)的目標(biāo)峰，每個(gè)區(qū)域的數(shù)據(jù)是重復(fù)采集區(qū)內(nèi)不同位置的5次樣品信號(hào)強(qiáng)度的平均值(采用DHB-BuN時(shí)，ＲSD＜6%;采用DHB時(shí)，ＲSD＜15%)。點(diǎn)間(Spot-to-spot)的重復(fù)性是測(cè)定6個(gè)不同樣品點(diǎn)的結(jié)果，在每個(gè)樣品點(diǎn)中間區(qū)域的不同位置采集5次數(shù)據(jù)的平均值。由圖2可見，采用DHB-BuN基質(zhì)測(cè)定的點(diǎn)內(nèi)峰強(qiáng)度ＲSD＜3%，點(diǎn)間ＲSD＜4%，可較好地進(jìn)行定量分析和成像研究。采用MALDI-MS成像方法測(cè)定靶上樣品在不同區(qū)域的信號(hào)強(qiáng)度分布，靶點(diǎn)的光學(xué)圖像和MS成像如圖3所示。從DHB基質(zhì)的光學(xué)圖像(A)可以看到產(chǎn)生了結(jié)晶，而DHB-BuN做基質(zhì)時(shí)的光學(xué)圖像(D)中可以看到DHB-BuN仍然以液體狀態(tài)存在。在質(zhì)譜儀高倍放大鏡頭下的分布見圖3B和3E。MALDI-MS成像的方法測(cè)定靶上樣品在不同區(qū)域的信號(hào)強(qiáng)度分布見圖3C和3F。采用DHB-BuN基質(zhì)時(shí)的信號(hào)強(qiáng)度分布明顯比DHB為基質(zhì)時(shí)樣品信號(hào)強(qiáng)度分布更均勻，這與文獻(xiàn)［34］和圖2的結(jié)果一致。圖2使用不同基質(zhì)測(cè)定寡糖樣品MS峰強(qiáng)度重復(fù)性Fig．2Ｒeproducibilitycomparisonofoligosaccharidesusingdifferentmatrices3．3質(zhì)譜信號(hào)強(qiáng)度與樣品濃度間的(線性)關(guān)系分別將6種不同濃度的(0．062～1．000mg/mL)蔗糖、棉籽糖、水蘇糖樣品與基質(zhì)混合超聲超1min，再用旋渦混合2min，使基質(zhì)和分析物充分混勻。用移液槍分別取1μL各濃度混合溶液，分別點(diǎn)在靶板上，MALDI-MS測(cè)定質(zhì)譜峰強(qiáng)度。測(cè)定樣品濃度與［M+Na］+峰強(qiáng)度的線性關(guān)系(圖4)，其中每個(gè)濃度的峰強(qiáng)度同樣是重復(fù)采集5次數(shù)據(jù)求?
【作者單位】： 上海應(yīng)用技術(shù)大學(xué)化學(xué)與環(huán)境工程學(xué)院;
【基金】：國家自然科學(xué)基金面上項(xiàng)目(No.31671928) 上海市自然科學(xué)基金項(xiàng)目(No.15ZR1440800)資助~~
【分類號(hào)】：O657.63;TS214.2

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本文編號(hào)：2549198