本文選題：抗菌肽 + 大腸桿菌��； 參考：《天津科技大學(xué)》2016年碩士論文

【摘要】：抗菌肽Plantaricin ZJ5是2014年從傳統(tǒng)發(fā)酵菜中分離得到的一種細(xì)菌素類抗菌肽,具有廣譜抗菌性,由22個氨基酸組成,分子量為2572.9 Da�？咕腗ytichitin-A是2014年從厚殼貽貝的血清中分離得到的一種新型抗菌肽,由55個氨基酸組成,分子量為6621.55 Da,分子內(nèi)有6個半胱氨酸,形成三對二硫鍵。在本研究中,將抗菌肽基因Plantaricin ZJ5和Mytichitin-A分別克隆到載體PGEX-2T和pMAL-c2x中,并轉(zhuǎn)入大腸桿菌BL21中,在IPTG的誘導(dǎo)下分別與GST標(biāo)簽和MBP標(biāo)簽進(jìn)行融合表達(dá)。并采用親和純化的方法得到了純度較高的融合蛋白GST-PlantaricinZJ5 和 GST-Mytichitin-A,產(chǎn)量分別為 113 mg/L 和 84 mg/L。用腸激酶將親和純化后融合蛋白的標(biāo)簽去除得到無氨基酸殘留的抗菌肽做抑菌圈實驗。但是,抑菌實驗的結(jié)果顯示,大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)獲得的抗菌肽Plantaricin ZJ5和Mytichitin-A均沒有抑菌活性。之后,我們將抗菌肽基因Mytichitin-A克隆到外泌型表達(dá)載體pPICZαA上。通過電轉(zhuǎn)化的方法,將SacI酶線性化的重組質(zhì)粒pPICZαA-Mytichitin-A轉(zhuǎn)入畢赤酵母GS115中。經(jīng)甲醇誘導(dǎo)后目的蛋白存在于酵母發(fā)酵液上清中。經(jīng)鎳柱親和純化其產(chǎn)量為150mg/L。抑菌實驗結(jié)果表明,重組表達(dá)抗菌肽Mytichitin-A對革蘭氏陽性菌金黃色葡萄球菌(ATCC 25923)和枯草芽孢桿菌151-1均有明顯的抑制作用,純化后的重組抗菌肽對金黃色葡萄球菌(ATCC 25923)有較強的抑制作用,最小抑制濃度(MIC)為31μg/mL。綜上所述,我們的實驗結(jié)果表明來源于厚殼貽貝血清中的抗菌肽Mytichitin-A能夠在畢赤酵母中有效表達(dá)并分泌至胞外。這是抗菌肽Mytichitin-A首次通過基因工程的方法成功表達(dá)且具有抑菌活性,這為抗菌肽的應(yīng)用提供了非常寶貴的實踐經(jīng)驗。
[Abstract]:In this study , we cloned the antibacterial peptide gene , Plantaricin ZJ5 , and Mytidyl - A into Pichia pastoris GS115 . The results showed that the antibacterial peptide Mytidyl - A was successfully expressed in Pichia pastoris .

【學(xué)位授予單位】：天津科技大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：O629.72

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本文編號：1798532