本文選題：脂質(zhì)體納米探針　切入點(diǎn)：信號(hào)放大　出處：《聊城大學(xué)》2017年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：近年來(lái),在生命分析化學(xué)領(lǐng)域中,對(duì)生物分子的檢測(cè)方法要求越來(lái)越高,構(gòu)建對(duì)生物大分子簡(jiǎn)單快速、靈敏精確、經(jīng)濟(jì)實(shí)惠、便捷有效的檢測(cè)策略已成為生命分析科學(xué)領(lǐng)域中研究的重點(diǎn)和熱點(diǎn)。生物分子信號(hào)放大技術(shù)在各種工具酶和納米磁球等生物材料的基礎(chǔ)上發(fā)展起來(lái),它是一種前沿的分析技術(shù),被廣泛地應(yīng)用于生物分子的檢測(cè)。血糖儀(PGM)是床邊檢測(cè)儀器(Point-of care testing POCT)的一個(gè)重大突破,它不僅能夠方便地為家庭商購(gòu)獲得,而且檢測(cè)過(guò)程還脫離了實(shí)驗(yàn)室的條件和儀器操作。由于它的便攜式“袖珍“尺寸、成本劃算、定量測(cè)定可靠、操作簡(jiǎn)單和即時(shí)得出結(jié)果等優(yōu)點(diǎn)已經(jīng)被廣泛應(yīng)用。脂質(zhì)體具有理想的生物相容性和巨大的內(nèi)部空腔,可以包封大量的生物分子設(shè)計(jì)成納米探針。因此,我們?cè)O(shè)計(jì)了以工具酶和納米磁球等為材料的熒光信號(hào)放大策略,并構(gòu)建出以多功能脂質(zhì)體納米探針為基礎(chǔ)的PGM檢測(cè)策略,實(shí)現(xiàn)了生物大分子的靈敏、經(jīng)濟(jì)、精確、便攜檢測(cè)。本論文分別利用PGM檢測(cè)和熒光檢測(cè)兩種檢測(cè)手段,主要以Dam甲基轉(zhuǎn)移酶、磷脂酶D為研究對(duì)象,構(gòu)建了多種新的信號(hào)放大檢測(cè)技術(shù)平臺(tái),實(shí)現(xiàn)了其定量分析。主要內(nèi)容包括:1、基于目標(biāo)物控制脂質(zhì)體“開(kāi)-關(guān)”的級(jí)聯(lián)放大策略構(gòu)建靈敏精確檢測(cè)乳腺癌細(xì)胞中磷脂酶D的新方法本章主要是基于目標(biāo)物控制脂質(zhì)體(TCGL)“開(kāi)-關(guān)”的級(jí)聯(lián)放大策略,用PGM對(duì)磷脂酶D進(jìn)行定量檢測(cè)。首先,我們將葡糖淀粉酶包裹于脂質(zhì)體之中,無(wú)需對(duì)葡糖淀粉酶進(jìn)行標(biāo)記,省去了標(biāo)記的復(fù)雜過(guò)程,保持了酶的原有生物活性。其次,檢測(cè)過(guò)程中使用便攜式定量設(shè)備血糖儀,繞開(kāi)了對(duì)復(fù)雜儀器的需求以及相應(yīng)的復(fù)雜操作,使我們的方法可以簡(jiǎn)單、靈活地應(yīng)用于原位檢測(cè)。該方法對(duì)磷脂酶D的檢測(cè)限達(dá)到0.005 U L~(-1)。此外,我們進(jìn)一步在乳腺癌細(xì)胞中對(duì)磷脂酶D實(shí)行活性檢測(cè)并且做了抑制劑藥物篩選實(shí)驗(yàn),都取得了很好的效果。2、基于磁球/脂質(zhì)體雜交探針構(gòu)建血糖儀靈敏便攜檢測(cè)DNA甲基轉(zhuǎn)移酶的新方法本章以磁球/脂質(zhì)體雜交探針為基礎(chǔ),構(gòu)建了一種以PGM為檢測(cè)工具,簡(jiǎn)單便攜、靈敏度高、特異性強(qiáng)的DNA甲基轉(zhuǎn)移酶活性檢測(cè)以及抑制劑篩選的新方法。首先,我們將p1DNA功能化的磁球與p2DNA功能化的包裹葡糖淀粉酶的脂質(zhì)體(GEL)雜交制備磁球-脂質(zhì)體雜交探針。然后,在DNA甲基轉(zhuǎn)移酶的存在下,雜交探針被甲基化,進(jìn)一步被對(duì)甲基化位點(diǎn)敏感的限制性內(nèi)切酶Dpn I切割,通過(guò)磁分離,脂質(zhì)體從磁球上分離下來(lái)。最后,用1%的Triton X-100溶液對(duì)分離下來(lái)的脂質(zhì)體進(jìn)行裂解,釋放出葡糖淀粉酶,葡糖淀粉酶將信號(hào)底物淀粉催化水解,產(chǎn)生大量的葡萄糖,隨之用血糖儀對(duì)葡萄糖進(jìn)行定量檢測(cè),檢測(cè)限達(dá)到2.0×10~(-4) U m L~(-1)。此外,我們進(jìn)一步在人血清中進(jìn)行了Dam甲基轉(zhuǎn)移酶的活性檢測(cè)實(shí)驗(yàn),取得了較好的結(jié)果。3、基于磁性納米顆粒協(xié)同核酸外切酶III輔助的循環(huán)放大構(gòu)建靈敏精確檢測(cè)DNA甲基轉(zhuǎn)移酶的新方法本章構(gòu)建了一種Dam甲基轉(zhuǎn)移酶活性檢測(cè)的熒光磁性生物傳感器,這種傳感器基于磁性納米粒子協(xié)同核酸外切酶III輔助的循環(huán)指數(shù)擴(kuò)增與超分子結(jié)構(gòu)鋅原卟啉/G-四鏈體相結(jié)合的協(xié)同信號(hào)放大策略。在該傳感器中,少量的甲基轉(zhuǎn)移酶可誘導(dǎo)出大量穩(wěn)定的DNA觸發(fā)器,導(dǎo)致了目標(biāo)物的顯著擴(kuò)增。而且,用磁性納米粒子作為傳感器的載體可以在實(shí)際樣品中減少干擾,這增強(qiáng)了傳感體系的抗干擾性�；谶@種獨(dú)特的擴(kuò)增策略,測(cè)出的檢測(cè)限為2.0×10~(-4) U m L~(-1)。此外,該傳感器不僅可用于評(píng)估大腸桿菌細(xì)胞不同生長(zhǎng)階段中甲基轉(zhuǎn)移酶的活性,還可以進(jìn)行甲基轉(zhuǎn)移酶抑制劑的篩選。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：聊城大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：O657.3

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本文編號(hào)：1582201