本文關(guān)鍵詞：乙酰膽堿酯酶酶源的篩選、提取及其特性研究　出處：《華南理工大學(xué)》2016年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

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【摘要】：本論文旨在進(jìn)行乙酰膽堿酯酶酶源的篩選,并對(duì)新酶源進(jìn)行乙酰膽堿酯酶的提取及特性研究,主要包括以下幾方面的內(nèi)容:1、經(jīng)植物及動(dòng)物酶源篩選,以雞腦作為新酶源,研究了雞腦粗酶提取條件及最適反應(yīng)體系,得最佳提取條件:料液比為1:4,以含0.5%TritonX-100的磷酸鹽緩沖液(0.1mol/L,pH8.0)作為提取液;最適反應(yīng)體系:緩沖液pH 8.0,37℃保溫15min以及底物濃度5mg/mL。2、建立了PEG-1000/(NH_4)_2SO_4雙水相體系萃取雞腦乙酰膽堿酯酶。雙水相萃取最佳條件:PEG-1000濃度為15.5%,(NH_4)_2SO_4濃度為14.9%,pH為6.3,粗酶濃度為14.9%;反萃取分離PEG-1000最佳條件:C_6H_5O_7Na_3緩沖液與上相體積比為8:1,pH5.0,即可得到純化后的雞腦乙酰膽堿酯酶。進(jìn)一步比較了雙水相萃取、硫酸銨分級(jí)鹽析、DEAE-52離子交換層析及Sephadex-200凝膠層析四種方法分離純化雞腦乙酰膽堿酯酶的效果,表明雙水相萃取方法不僅純化倍數(shù)及回收率高,而且具有用時(shí)短、成本低的優(yōu)點(diǎn)。3)、研究了雞腦乙酰膽堿酯酶的酶學(xué)性質(zhì):等電點(diǎn)pI為5.15,Km為5.67×10~(-5mol/L,Vm為0.20×10~2mol/(min·L),在40℃以下具有良好的熱穩(wěn)定性,在pH5~9緩沖液環(huán)境下具有良好的pH穩(wěn)定性。初步研究了雞腦乙酰膽堿酯酶對(duì)6種氨基甲酸酯類有毒成分(呋喃丹、滅多威、西維因、涕滅威、速滅威、氨基甲酸乙酯)的敏感性,并與雞腦粗酶和家蠅乙酰膽堿酯酶進(jìn)行了比較。發(fā)現(xiàn)氨基甲酸乙酯對(duì)三種酶均無抑制作用;雞腦乙酰膽堿酯酶比雞腦粗酶對(duì)有毒成分具有更高的敏感性;抑制動(dòng)力學(xué)、半抑制濃度和雙分子速率常數(shù)三種測定結(jié)果一致,均證明了雞腦乙酰膽堿酯酶較家蠅乙酰膽堿酯酶具有更強(qiáng)的敏感性,更有利于低濃度氨基甲酸酯類有毒成分殘留的檢測。
【學(xué)位授予單位】：華南理工大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：O629.8;TS207.3

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本文編號(hào)：1323159