本文關(guān)鍵詞：基于銅納米粒子的生物分析新方法研究

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【摘要】：納米材料因為其獨特性質(zhì)引起了廣泛的關(guān)注。銅納米粒子因為其特殊性質(zhì)多應用于傳感器、催化等方面。近年來,銅納米粒子在生物分析領(lǐng)域的應用發(fā)展迅速。免疫分析和DNA檢測在生命科學和醫(yī)學領(lǐng)域都有著十分重要的意義。原子吸收光譜(AAS)和電感耦合等離子體質(zhì)譜(ICP-MS)在元素分析方面有著廣泛的應用,它們可直接檢測納米探針中的金屬元素,無需探針的光、電等特殊性質(zhì),這樣就降低了探針的合成難度。此外,它們具有高靈敏度的特點,被越來越多的應用于生物分析領(lǐng)域。在第1章中,簡述了納米粒子的基本性質(zhì)及制備方法,介紹了納米氧化銅的應用及研究現(xiàn)狀,并對原子吸收光譜和免疫分析以及電感耦合等離子體質(zhì)譜和無標記DNA分析的研究進展進行了介紹。在第2章中,本文建立了一種新型的免疫分析方法。根據(jù)標記物及檢測方法的不同,標記免疫分析技術(shù)可以分為放射免疫分析、熒光免疫分析、酶免疫分析、金屬免疫分析、發(fā)光免疫分析、電化學免疫分析等。在納米氧化銅和抗體通過靜電結(jié)合后,我們就研究了基于原子吸收光譜檢測的金屬納米粒子標記的免疫分析方法。首先,我們考察了醇熱法制備納米氧化銅膠體,制備出了能穩(wěn)定保存的納米氧化銅膠體。然后,使納米氧化銅和羊抗人IgG結(jié)合成銅標結(jié)合物,在96孔多孔板上進行了三明治夾心免疫反應檢測人IgG。經(jīng)稀硝酸溶解銅之后進行檢測,原子吸收光譜信號與人IgG濃度呈現(xiàn)正相關(guān)的關(guān)系。我們優(yōu)化了封閉液(BSA)濃度以及銅標結(jié)合物稀釋倍數(shù)。實驗結(jié)果表明原子吸收光譜信號與人IgG濃度的對數(shù)在10-9-10-5 g/mL范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系,檢出限為0.19 ng/mL。在第3章中,本文建立了一種新型的無標記DNA檢測方法。DNA檢測方法通常分為標記法和無標記法,無標記法由于不需要復雜的操作步驟而在近年來發(fā)展迅速。研究表明,銅離子能在雙鏈DNA存在的情況下被還原劑還原為銅納米粒子,單鏈DNA和三鏈DNA都沒有這種現(xiàn)象。DNA常用的放大技術(shù)有聚合酶鏈式反應、連接酶鏈式反應、鏈替代擴增反應以及滾環(huán)放大反應等,這些反應所用到的酶的活性很容易受到多種因素的影響。因此,無酶催化的雜交鏈式反應(HCR)有很大的優(yōu)勢。本實驗建立了一種基于電感耦合等離子體質(zhì)譜檢測的無標記、無酶催化的DNA檢測方法。具體實驗步驟是,在磁珠上結(jié)合捕獲DNA,然后與目標DNA結(jié)合,之后進行雜交鏈式放大,形成的雙鏈DNA能促使銅納米粒子的生成。最后,加稀硝酸溶解銅,在ICP-MS上進行檢測。銅的信號強度與所加目標DNA的濃度成正比例關(guān)系。實驗對銅離子濃度、還原劑濃度、HCR反應時間以及發(fā)卡探針的濃度進行了優(yōu)化。ICP-MS信號強度與目標DNA的濃度在1 nM-100 nM范圍內(nèi)呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系,檢出限為0.803 nM。
【關(guān)鍵詞】：銅納米粒子 免疫分析 原子吸收光譜 無標記DNA檢測 電感耦合等離子體質(zhì)譜
【學位授予單位】：成都理工大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：O657.3;TB383.1
【目錄】：

• 摘要4-6
• Abstract6-10
• 第1章 引言10-29
• 1.1 納米粒子綜述10-14
• 1.1.1 納米粒子簡介10
• 1.1.2 納米粒子的性質(zhì)10-12
• 1.1.3 納米材料的制備方法12-14
• 1.2 納米氧化銅的性質(zhì)及應用14-16
• 1.2.1 納米氧化銅的性質(zhì)14
• 1.2.2 納米氧化銅的應用14-16
• 1.3 原子吸收光譜及免疫反應簡介16-23
• 1.3.1 原子吸收光譜概述16-17
• 1.3.2 石墨爐原子吸收分光光度計結(jié)構(gòu)17-19
• 1.3.3 免疫反應簡介19-23
• 1.4 電感耦合等離子體質(zhì)譜及無標記DNA測定方法簡介23-29
• 1.4.1 ICP-MS概述23
• 1.4.2 ICP-MS基本結(jié)構(gòu)23-25
• 1.4.3 無標記DNA測定方法25-29
• 第2章 基于銅納米粒子標記的原子吸收光譜免疫分析方法29-41
• 2.1 引言29-30
• 2.2 實驗部分30-32
• 2.2.1 儀器與試劑30
• 2.2.2 納米氧化銅的制備30
• 2.2.3 納米氧化銅抗體結(jié)合物的制備30-31
• 2.2.4 免疫分析過程31
• 2.2.5 原子吸收光譜檢測31-32
• 2.3 結(jié)果與討論32-40
• 2.3.1 納米氧化銅合成條件優(yōu)化32-35
• 2.3.2 石墨爐原子吸收測銅條件優(yōu)化35-37
• 2.3.3 免疫分析條件優(yōu)化37-38
• 2.3.4 分析性能38
• 2.3.5 樣品分析38-40
• 2.4 結(jié)論40-41
• 第3章 基于銅納米粒子的無標記DNA檢測方法41-52
• 3.1 引言41-42
• 3.2 實驗部分42-43
• 3.2.1 儀器與試劑42
• 3.2.2 磁珠預處理與修飾42-43
• 3.2.3 檢測步驟43
• 3.2.4 電感耦合等離子體質(zhì)譜檢測43
• 3.3 結(jié)果與討論43-51
• 3.3.1 實驗原理43-45
• 3.3.2 實驗條件優(yōu)化45-49
• 3.3.3 分析性能49
• 3.3.4 方法驗證49-51
• 3.4 結(jié)論51-52
• 結(jié)論52-53
• 致謝53-54
• 參考文獻54-59
• 攻讀學位期間取得學術(shù)成果59

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1 趙金富,王永成,張明萱,李元宗,常文保;控溫相變免疫分析測定雌酮[J];分析化學;2003年02期

2 嚴楓;鞠q，

本文編號：1097816