本文關(guān)鍵詞：細(xì)顆粒物對(duì)細(xì)胞的毒性研究

  更多相關(guān)文章： 大氣細(xì)顆粒物 納米TiO_2 細(xì)胞毒性 細(xì)胞凋亡

【摘要】：大氣細(xì)顆粒物的細(xì)胞毒性與顆粒物的粒徑、染毒劑量和顆粒物上吸附的物質(zhì)有關(guān)。為了研究大氣細(xì)顆粒物的細(xì)胞毒性與顆粒物粒徑的關(guān)系,以杭州市城區(qū)居民區(qū)為采樣點(diǎn),用DLPI分級(jí)采樣器進(jìn)行采用,進(jìn)行了大氣細(xì)顆粒物對(duì)A549細(xì)胞的毒性試驗(yàn)。納米二氧化鈦(納米TiO_2)由于其納米特性,也屬于細(xì)顆粒物。為了更全面的評(píng)價(jià)顆粒物對(duì)細(xì)胞的毒性作用,本課題先采用不同粒徑的納米TiO_2對(duì)細(xì)胞進(jìn)行毒性試驗(yàn),研究納米TiO_2對(duì)細(xì)胞的毒性作用與其粒徑大小的關(guān)系,進(jìn)一步比較納米TiO_2和大氣細(xì)顆粒物對(duì)細(xì)胞毒性的差異。染毒濃度相同時(shí),納米TiO_2粒徑越小,細(xì)胞活性越小,細(xì)胞膜受到的損傷程度越大。大氣細(xì)顆粒物對(duì)細(xì)胞進(jìn)行染毒也得到了相同的試驗(yàn)結(jié)果,并且納米TiO_2和大氣細(xì)顆粒物對(duì)細(xì)胞的最佳毒性濃度(細(xì)胞表現(xiàn)較強(qiáng)毒性作用時(shí)的最低濃度)均為10μg/mL。納米TiO_2在水中的溶解度較小,大氣細(xì)顆粒物包括水溶性和水不溶性成分。染毒濃度高于10μg/mL時(shí)細(xì)胞活性變化不大,可能是由于受到其在細(xì)胞培養(yǎng)液中溶解度的影響。在細(xì)胞最佳毒性濃度下對(duì)細(xì)胞氧化損傷進(jìn)行分析,可知細(xì)胞內(nèi)ROS活性隨著納米TiO_2粒徑的增加而減小,而GSH水平和SOD水平則與粒徑大小正相關(guān)。大氣細(xì)顆粒物對(duì)細(xì)胞進(jìn)行氧化損傷試驗(yàn)也得到了相同的規(guī)律。顆粒粒徑越小細(xì)胞活性越小,細(xì)胞受到的氧化損傷程度越強(qiáng),ROS活性越高。而GSH和SOD作為能夠抑制細(xì)胞氧化損傷的酶,細(xì)胞受到氧化損傷時(shí),其活性降低。RT-PCR測(cè)試細(xì)胞凋亡基因mRNA相對(duì)表達(dá)量發(fā)現(xiàn),染毒濃度為10μg/mL時(shí),發(fā)現(xiàn)隨著顆粒粒徑的增加,P53、BCL-2和BAX的相對(duì)表達(dá)量均隨著顆粒物粒徑的增加而減小。納米TiO_2和大氣細(xì)顆粒物有相同的趨勢(shì)。這說(shuō)明凋亡基因的表達(dá)的影響與顆粒的粒徑的大小負(fù)相關(guān),顆粒粒徑越小,對(duì)細(xì)胞的凋亡作用越大,細(xì)胞內(nèi)凋亡基因的表達(dá)量也越大。納米TiO_2和大氣細(xì)顆粒物的細(xì)胞毒性試驗(yàn)對(duì)比發(fā)現(xiàn),雖然納米TiO_2和大氣細(xì)顆粒物的粒徑不同,其對(duì)細(xì)胞的毒性趨勢(shì)是相同的。在細(xì)顆粒物的粒徑范圍內(nèi),A549細(xì)胞的細(xì)胞毒性受顆粒粒徑的影響較大,顆粒粒徑越小,細(xì)胞毒性越大。對(duì)比大氣細(xì)顆粒物和納米TiO_2的細(xì)胞毒性大小發(fā)現(xiàn),大氣細(xì)顆粒物引起的細(xì)胞氧化應(yīng)激、凋亡基因的表達(dá)均高于納米TiO_2,即大氣細(xì)顆粒物引起的細(xì)胞毒性的因素比納米TiO_2復(fù)雜,研究大氣細(xì)顆粒物的毒性具有一定的意義。
【關(guān)鍵詞】：大氣細(xì)顆粒物 納米TiO_2 細(xì)胞毒性 細(xì)胞凋亡
【學(xué)位授予單位】：浙江工業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：X513;X171.5
【目錄】：

• 致謝5-6
• 摘要6-8
• ABSTRACT8-10
• 引言10-14
• 符號(hào)說(shuō)明14-15
• 第一章 緒論15-25
• 1.1 概述15-17
• 1.1.1 大氣細(xì)顆粒物15-16
• 1.1.2 納米TiO_216-17
• 1.2 研究現(xiàn)狀17-23
• 1.2.1 大氣細(xì)顆粒物的研究現(xiàn)狀17-20
• 1.2.2 納米TiO_2的研究現(xiàn)狀20-23
• 1.3 本研究意義與內(nèi)容23-25
• 1.3.1 研究意義23-24
• 1.3.2 研究?jī)?nèi)容24
• 1.3.3 創(chuàng)新點(diǎn)24-25
• 第二章 實(shí)驗(yàn)部分25-41
• 2.1 實(shí)驗(yàn)材料與設(shè)備25-27
• 2.1.1 試驗(yàn)細(xì)胞25
• 2.1.2 試驗(yàn)材料25
• 2.1.3 試驗(yàn)儀器與設(shè)備25-26
• 2.1.4 其他器材26-27
• 2.2 細(xì)顆粒物27-30
• 2.2.1 不同尺度的納米TiO_227-28
• 2.2.2 大氣細(xì)顆粒物的采集28-30
• 2.2.3 不同粒徑的大氣細(xì)顆粒物和納米TiO_2懸液的制備30
• 2.3 細(xì)胞培養(yǎng)30-31
• 2.3.1 細(xì)胞復(fù)蘇30
• 2.3.2 細(xì)胞傳代30-31
• 2.3.3 細(xì)胞凍存31
• 2.4 細(xì)胞染毒31
• 2.5 細(xì)胞試驗(yàn)31-40
• 2.5.1 細(xì)胞損傷效應(yīng)31-33
• 2.5.2 細(xì)胞氧化損傷33-36
• 2.5.3 細(xì)胞凋亡基因的表達(dá)36-40
• 2.6 統(tǒng)計(jì)方法40-41
• 第三章 不同粒徑的納米TiO_2對(duì)細(xì)胞的毒性研究41-51
• 3.1 引言41
• 3.2 不同尺度納米TiO_2顆粒的表征41-43
• 3.3 細(xì)胞損傷效應(yīng)43-45
• 3.3.1 細(xì)胞活性的檢測(cè)43-44
• 3.3.2 細(xì)胞膜完整性的檢測(cè)44-45
• 3.4 細(xì)胞氧化損傷45-48
• 3.4.1 ROS水平的檢測(cè)46
• 3.4.2 GSH的檢測(cè)46-47
• 3.4.3 SOD的檢測(cè)47-48
• 3.5 細(xì)胞凋亡基因的表達(dá)48-49
• 3.5.1 RT-PCR測(cè)細(xì)胞凋亡基因mRNA表達(dá)48-49
• 3.6 小結(jié)49-51
• 第四章 不同粒徑的大氣細(xì)顆粒物對(duì)細(xì)胞的毒性研究51-63
• 4.1 引言51-52
• 4.2 細(xì)胞損傷效應(yīng)52-54
• 4.2.1 細(xì)胞增殖檢測(cè)52-53
• 4.2.2 細(xì)胞膜完整性的檢測(cè)53-54
• 4.3 細(xì)胞氧化損傷54-57
• 4.3.1 ROS水平的檢測(cè)54-55
• 4.3.2 GSH的檢測(cè)55-56
• 4.3.3 SOD的檢測(cè)56-57
• 4.4 細(xì)胞凋亡基因的表達(dá)57-58
• 4.4.1 RT-PCR測(cè)定細(xì)胞凋亡基因mRNA表達(dá)57-58
• 4.5 大氣細(xì)顆粒物和納米TiO_2細(xì)胞毒性的對(duì)比58-61
• 4.6 小結(jié)61-63
• 第五章 結(jié)論63-65
• 5.1 結(jié)論63-64
• 5.2 展望64-65
• 參考文獻(xiàn)65-72
• 作者簡(jiǎn)介72
• 1 作者簡(jiǎn)歷72
• 2 攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文72
• 3 參與的科研項(xiàng)目及獲獎(jiǎng)情況72

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