有機(jī)磷農(nóng)藥因環(huán)境污染和食藥殘留問題嚴(yán)重威脅著人們的身心健康,這使有機(jī)磷農(nóng)藥降解酶的研發(fā)迫在眉睫。降解有機(jī)磷農(nóng)藥的主要酶類是磷酸三酯酶,因其成本低、快速解毒而引起人們的廣泛關(guān)注,而來源于嗜熱菌中的酶類以其穩(wěn)定性好、活力高而備受青睞。本試驗(yàn)從嗜熱菌Thermaerobacter subterranean BAA137中調(diào)取磷酸三酯酶基因(PTE),構(gòu)建重組質(zhì)粒pET-28a-PTE,經(jīng)轉(zhuǎn)化誘導(dǎo)在大腸桿菌BL21中高效表達(dá)。通過組氨酸鎳柱分離純化、SDS-PAGE和Western-blot鑒定,得到目標(biāo)蛋白,并進(jìn)行酶學(xué)性質(zhì)表征。(1)對(duì)嗜熱菌Thermaerobacter subterranean BAA137進(jìn)行復(fù)壯培養(yǎng),結(jié)果表明:2%接種量、60℃靜置培養(yǎng)24h為嗜熱菌最適生長(zhǎng)條件,這極大縮短了嗜熱菌的生長(zhǎng)周期。(2)以嗜熱菌TS基因?yàn)槟０?PCR擴(kuò)增出磷酸三酯酶基因,構(gòu)建重組質(zhì)粒pET-28a(+),測(cè)序結(jié)果表明磷酸三酯酶基因克隆成功。(3)對(duì)重組酶進(jìn)行性質(zhì)表征,結(jié)果顯示:重組磷酸三酯酶是別構(gòu)酶,V_max為101.81U/mg,Hill系數(shù)n為0.8,顯示負(fù)協(xié)同效...

【文章頁數(shù)】：44 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖3.1嗜熱菌培養(yǎng)結(jié)果

3結(jié)果與分析robactersubterraneanBAA137的培養(yǎng)方法進(jìn)行復(fù)蘇，選擇用胰5℃，60℃和65℃。雖然溫度的降0℃培養(yǎng)嗜熱菌的產(chǎn)量與65℃相同按照體積比在2%時(shí)，嗜熱菌在2時(shí)間過長(zhǎng)，反之，細(xì)胞培養(yǎng)速度加養(yǎng)條件溫度較高平板容易失水快，點(diǎn)，且選擇用斜面培....

圖3.4重組質(zhì)粒的構(gòu)建Fig.3.4Constructionofrecombinantplasmid

M-Marker；1-重組質(zhì)粒圖3.4重組質(zhì)粒的構(gòu)建Fig.3.4ConstructionofrecombinantplasmidM-Marker；1-PCR產(chǎn)物圖3.5PCR鑒定Fig.3.5PCRidentification粒構(gòu)建電泳結(jié)果可以知道，重....

圖3.5PCR鑒定Fig.3.5PCRidentification

23M-Marker；1-PCR產(chǎn)物圖3.5PCR鑒定Fig.3.5PCRidentification建電泳結(jié)果可以知道，重組質(zhì)。由圖3.5PCR鑒定結(jié)果可知，基因成功，測(cè)序結(jié)果也表明重純化液體培養(yǎng)基，37℃振蕩培養(yǎng)至度1mM，30℃過夜培養(yǎng)。誘導(dǎo)超聲波破....

圖3.7磷酸三酯酶最適溫度Fig.3.7Theoptimaltemperatureofphosphotriesterase

M-Marker；1-菌液電泳；2-SDS-PAGE電泳；3-蛋白免疫印跡圖3.6蛋白電泳圖Fig.3.6Proteinelectrophoresis的酶學(xué)性質(zhì)表征和pH量的條件下測(cè)定30-90℃的酶活力，觀察溫度對(duì)酶活性為100%，平行測(cè)定三次取平均值，如圖3....

本文編號(hào)：3929986