鉈是一種劇毒重金屬,在地球上分布廣泛但是含量很低,所以對(duì)鉈的關(guān)注度很低。隨著近些年工業(yè)生產(chǎn),鉈做為一種重金屬污染物已經(jīng)在國(guó)內(nèi)外多個(gè)地方造成了中毒事件,引起了國(guó)內(nèi)外的重視。因此對(duì)于鉈的毒性研究是必要的。對(duì)于重金屬毒性的評(píng)價(jià)方法,國(guó)際上一般采用生物體的毒理實(shí)驗(yàn)。水生生物作為水環(huán)境中重要的組成部分,對(duì)水體中重金屬的毒性研究有著重要的指示作用。鉈在自然界中的存在形式常常受礦物所影響,因此選用錳氧化物來(lái)模擬自然界中的礦物進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。本文選用兩種水生生物來(lái)進(jìn)行實(shí)驗(yàn),斑馬魚(yú)和小球藻。通過(guò)對(duì)斑馬魚(yú)全身及各個(gè)器官(肝、腸、鰓、腦)的積累濃度,分析鉈及錳氧化物對(duì)斑馬魚(yú)的毒性效應(yīng)。結(jié)果表明,鉈在肝中的積累量最大,因?yàn)楦闻K是生物體重要的代謝器官。同時(shí),由于錳氧化物對(duì)鉈的吸附作用,實(shí)驗(yàn)中添加錳氧化物的復(fù)合體系對(duì)斑馬魚(yú)的積累濃度均低于單一鉈的體系。通過(guò)對(duì)斑馬魚(yú)各個(gè)器官(肝、腸、鰓、腦)的氧化應(yīng)激指標(biāo)(活性氧ROS、超氧化物歧化酶SOD、過(guò)氧化氫酶CAT、脂質(zhì)含量MDA)以及對(duì)神經(jīng)毒性的測(cè)定。結(jié)果表明,重金屬鉈可以誘導(dǎo)斑馬魚(yú)各個(gè)器官中酶的活性的增加,然而,隨著時(shí)間的增加,酶的活性有所下降,但酶活的水平仍然高于空白對(duì)照組。單一鉈的體系比錳氧化物和鉈的復(fù)合體系對(duì)酶活性刺激性更大。單一鉈體系對(duì)ACh E的活性的刺激作用也更大。暴露在鉈溶液中的小球藻,在濃度較低時(shí),重金屬對(duì)其生長(zhǎng)起促進(jìn)作用,高濃度則會(huì)抑制它的生長(zhǎng)。SOD活性的測(cè)定和MDA含量的測(cè)定與斑馬魚(yú)實(shí)驗(yàn)結(jié)果相似。
【學(xué)位單位】：東北石油大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類(lèi)】：X171.5
【部分圖文】：

第二章 鉈對(duì)斑馬魚(yú)的生物積累釋水曝氣至溶解氧濃度達(dá)到空氣飽和值（ASV），pH 穩(wěn)定在L 左右（以 CaCO3 計(jì)）。配制成 Tl(I)（5、50μg/L）與錳氧化單一 Tl(I) （5、50μg/L）的體系、單一錳氧化物體系（0.1共 6 組實(shí)驗(yàn)。根據(jù)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)（GB/T13267-1991）中對(duì)于靜水規(guī)定，挑選健康且大小均一的斑馬魚(yú)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，一個(gè)燒杯中塑料燒杯，192 條斑馬魚(yú)。設(shè)置 8 個(gè)平行實(shí)驗(yàn)，其中 4 個(gè)平行實(shí)驗(yàn)做斑馬魚(yú)全身毒性積官（肝臟、魚(yú)腸、魚(yú)鰓、魚(yú)腦）的毒性積累。外界條件干擾對(duì)魚(yú)造成不必要的擾動(dòng)，將實(shí)驗(yàn)所用的燒杯置白天/黑天=14/10 小時(shí)，溫度為 23 0.5 °C。整個(gè)實(shí)驗(yàn)期間不

具體方法為：用 DMSO（二甲基亞砜）將 DCFH-DA 稀釋 1加入 10 mL DMSO 和 10 μL DCFH-DA。在 96 孔板中加入 2入生理鹽水以做空白，然后再加入 100 μLDCFH-DA 稀釋液rpm 避光孵育 20min 后，用多功能微孔板酶標(biāo)儀在 488nm 激檢測(cè)熒光。測(cè)定方法歧化酶(Superoxide Dismutase, SOD)是生物組織和細(xì)胞中一生物體內(nèi)的有害物質(zhì)所產(chǎn)生的氧自由基。它能催化過(guò)氧陰離2和 O2。用 CuZn/Mn-SOD 活性檢測(cè)試劑盒（WST-8 法）（碧云天生），這是一種利用 WST-8 的顯色反應(yīng)，通過(guò)吸光度測(cè)定來(lái)檢D 活性。WST-8 法的原理如下圖 3-1， WST-8 和黃嘌呤氧化子反應(yīng)產(chǎn)生水溶性的甲佨染料(formazandye)，該反應(yīng)可以被8 產(chǎn)物的比色分析即可計(jì)算 SOD 的酶活力。

1.5 mL 離心管內(nèi)加入 40 μL 過(guò)氧化氫酶檢測(cè)緩沖液，再加入 10 μL 的上一步終迅速混勻；在 96 孔板中加入 200 μL 顯色工作液，再加入 10 μL 以上體系，同空白。在 25°C 振蕩箱中，以 300rpm 孵育 15min 后，用多功能微孔板酶標(biāo)儀0。同時(shí)配制過(guò)氧化氫標(biāo)準(zhǔn)曲線：取 0、10、25、50、75μL5mM 過(guò)氧化氫溶液和 75、50、25 μL 過(guò)氧化氫酶檢測(cè)緩沖液至 1.5 mL，取 4 μL 加入到在 96 孔板中00 μL 顯色工作液。與樣品一起測(cè)定。3.4 MDA 的測(cè)定方法本實(shí)驗(yàn)采用脂質(zhì)氧化( MDA )檢測(cè)試劑盒( Lipid Peroxidation MDA Assay Kit )生物技術(shù)有限公司，中國(guó)上海）。這是一種基于 MDA 和硫代巴比妥酸(thiobarb, TBA)反應(yīng)產(chǎn)生紅色產(chǎn)物的顯色反應(yīng)，通過(guò)比色法進(jìn)行測(cè)定，從而確定 alondialdehyde，丙二醛）的含量。MDA 在較高溫度及酸性環(huán)境 pH 低的時(shí)候可與 TBA 發(fā)生反應(yīng)，形成紅色的 M 產(chǎn)物，該產(chǎn)物最大吸收波長(zhǎng)是 535 nm，相應(yīng)的反應(yīng)原理圖如下圖 3-2：

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2831939