適配體作為一種新型生物識別分子,本質(zhì)是一段能夠通過相應(yīng)的結(jié)構(gòu)變化與靶標(biāo)分子以高親和力和高特異性結(jié)合的寡核苷酸序列。適配體的篩選是在體外通過指數(shù)富集配體系統(tǒng)進化技術(shù)(SELEX)完成的,篩選得到的適配體在測定序列后,即可在一定的化學(xué)條件下重復(fù)合成用于進一步的研究,合成條件可控并且合成適配體的性能均一,不受合成批次的影響。相比于目前常用的生物識別分子---抗體,適配體除了易合成、性能均一外,還具有靶標(biāo)范圍更廣(理論上包括毒性物質(zhì)在內(nèi)的各種小分子、大分子、細胞甚至生物組織)、生物穩(wěn)定性更好、更易于標(biāo)記修飾且改造后仍可保持良好的生物功能活性等獨特優(yōu)勢,這都使得適配體成為近幾年分析領(lǐng)域的研究熱點,并與多種分析技術(shù)相結(jié)合,成功應(yīng)用于比色、熒光、電化學(xué)等多種分析檢測方法的開發(fā)。本研究以適配體技術(shù)為基礎(chǔ)結(jié)合納米金,首次建立了一種利用特定適配體同時檢測6種有機磷農(nóng)藥的納米金比色快速檢測方法;對適配體進行優(yōu)化,基于片段化適配體熒光淬滅機理建立了特異性良好的19-去甲基睪酮快速檢測方法;對納米金粒徑對檢測靈敏度的影響進行研究,建立了一種快速有效的滅蠅胺納米金比色檢測方法。主要研究內(nèi)容包括以下三部分:1.利用一段可與特定有機磷農(nóng)藥特異性結(jié)合的55個堿基長度序列的適配體結(jié)合納米金比色技術(shù),首次建立了基于適配體-納米金比色原理的6種有機磷農(nóng)藥快速檢測方法,并成功應(yīng)用于河水實際樣品中有機磷農(nóng)藥的檢測,雖然方法的靈敏度還有待提高,但為適配體技術(shù)在農(nóng)藥殘留快速檢測方法中的應(yīng)用提供了新的思路。2.在本課題組關(guān)于適配體長度對適配體納米金比色法靈敏度影響的研究基礎(chǔ)之上,我們發(fā)現(xiàn)原長度76個堿基的17β-雌二醇適配體在片段化后對19-去甲基睪酮具有很強的親和性,這可能是因為二者的結(jié)構(gòu)相似,而目前針對19-去甲基睪酮的特異性適配體并未有篩選成功的報道。因此,我們將17β-雌二醇適配體的片段P1和P2分別標(biāo)記熒光淬滅基團BHQ和熒光基團6FAM,建立了一種簡單的基于熒光共振能量轉(zhuǎn)移原理的夾心熒光檢測法,實現(xiàn)了對19-去甲基睪酮的有效檢測。該方法在1μM-1000μM熒光強度與濃度對數(shù)呈負相關(guān),優(yōu)化后方法的檢測限為5μM,并在尿液實際樣品中成功應(yīng)用,3個加標(biāo)濃度下所得加標(biāo)回收率為57.94%-118.76%,平均RSD小于7%,方法具有較好的重復(fù)性和穩(wěn)定性。3.建立了基于納米金比色的滅蠅胺可視化檢測方法。通過比較一系列不同粒徑(13nm、16nm、30nm、35nm)的納米金溶液的方法靈敏度,最終確定該可視化檢測滅蠅胺的方法中納米金的最佳反應(yīng)粒徑為30nm。該方法利用了滅蠅胺自身的結(jié)構(gòu)特性以及與納米金之間的結(jié)合特性,在未引入任何額外特定受體的情況下,向納米金溶液中加入滅蠅胺后顏色即可由紅變藍,結(jié)果直觀肉眼可見,也可用紫外分光光度計檢測到相應(yīng)吸光度值的變化,從而建立了超快速的滅蠅胺比色檢測方法并在河水實際樣品中得以應(yīng)用。
【學(xué)位單位】：中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2016
【中圖分類】：O657.3;X832

【參考文獻】

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本文編號：2816779