發(fā)布時間：2020-09-07 21:29

　　 羥基多溴聯(lián)苯醚(OH-PBDEs)作為一種可由母體多溴聯(lián)苯醚(PBDEs)代謝而來的產(chǎn)物,因其分子結(jié)構(gòu)和甲狀腺激素(T4)相似,能夠與甲狀腺激素轉(zhuǎn)移蛋白(TTR)結(jié)合,進而顯著影響體內(nèi)的甲狀腺激素水平,具有更高的內(nèi)分泌干擾效應(yīng),引起了國內(nèi)外學者的重點關(guān)注。目前OH-PBDEs已在環(huán)境介質(zhì)、生物體甚至人體中均有檢出。有研究表明OH-PBDEs可以在生物體內(nèi)通過生物酶催化氧化進一步形成一相代謝產(chǎn)物。其代謝速率受溴原子數(shù)量及羥基、溴原子和醚鍵三者之間的位置等因素影響。因此有必要探索OH-PBDEs在生物組織中的代謝機理,及對生物體內(nèi)雌激素代謝的影響,為更全面的評價OH-PBDEs在生物體的代謝行為和毒性效應(yīng)提供理論基礎(chǔ)。本論文以5’-OH-BDE-99、6’-OH-BDE-99、6-OH-BDE-99和6-OH-BDE-137四種典型OH-PBDEs作為研究對象,使用小鼠肝臟作為反應(yīng)基質(zhì),用體外代謝的模式,研究了4種結(jié)構(gòu)相似的OH-PBDEs在小鼠肝臟中的體外代謝情況,并考察對4種雌激素(E1、E2、E3、EE2)代謝的影響。使用HPLC-MS/MS定量分析代謝產(chǎn)物2-OH-E2;應(yīng)用化學抑制劑初步探索了小鼠肝臟微粒體中代謝4種OH-PBDEs的關(guān)鍵酶(CYP450酶)。主要研究結(jié)果如下:(1)4種OH-PBDEs能夠在小鼠肝臟S9中發(fā)生代謝,其代謝程度為6’-OH-PBDE-996-OH-BDE-995’-OH-BDE-996-OH-BDE-137,通過結(jié)構(gòu)與代謝關(guān)系分析發(fā)現(xiàn),OH官能團與Br原子取代位置的不同影響了4種OH-PBDEs的代謝水平。S9體系中OH-PBDEs對雌激素的代謝影響實驗表明,實驗中各個濃度(1.5、3、6μM)的OH-PBDEs對E1、E2代謝率沒有顯著性影響;而對E3代謝具有明顯的抑制現(xiàn)象;高濃度的OH-PBDEs對EE2代謝具有抑制現(xiàn)象,但是不具有顯著性差異。(2)4種OH-PBDEs在小鼠肝臟微粒體中代謝表明,4種OH-PBDEs相對于母體PBDEs更容易被代謝,說明了羥基官能團的引入提高了母體PBDEs的生物利用性;在與S9中代謝相同溴原子取代位相同時,結(jié)果發(fā)現(xiàn)醚鍵與OH官能團及Br原子互為鄰位時代謝率最高。通過ECOD表征實驗發(fā)現(xiàn),4種OH-PBDEs對微粒體ECOD活性存在不同作用�？傮w趨勢表現(xiàn)為隨著反應(yīng)體系中OH-PBDEs濃度的增加,5'-OH-BDE-99在低濃度(1.5μM)下顯著促進ECOD活性(P0.05);6'-OH-BDE-99隨濃度的增加,對ECOD活性的影響不明顯;6-OH-BDE-99隨濃度的增加會降低ECOD活性(P0.05);6-OH-BDE-137在低濃度(1.5μM)下對ECOD活性無顯著影響,但是隨著濃度的增加顯著促進ECOD活性(P0.05)。根據(jù)抑制劑實驗結(jié)果表明CYP2C9是微粒體代謝5’-OH-BDE-99和6’-OH-BDE-99的關(guān)鍵酶系,而CYP1A2、CYP3A4亞型更多的參與了6-OH-BDE-99和6-OH-BDE-137的代謝,其中CYP1A2的貢獻最大;CYP2D6對4種OH-PBDEs的代謝起次要作用。(3)微粒體體系中4種OH-PBDEs所設(shè)濃度(1.5、3、6μM)對4種雌激素表現(xiàn)出不同效應(yīng)。處于鄰位的6-OH-BDE-99會促進E1的代謝且隨著濃度的升高而趨于平緩,但當OH與Br原子處于對位(5’-OH-BDE-99)時會抑制E1在體內(nèi)的代謝。此外,6-OH-BDE-99會促進E2的代謝但達到一定濃度之后E2會隨著濃度增大代謝受到抑制;OH與Br原子處于對位時對E2代謝的抑制作用較為明顯,說明OH-PBDEs對生物體內(nèi)E2代謝的差異可能源于OH-PBDEs對代謝體系酶活性的影響所致。4種OH-PBDEs可使E3快速代謝,但對EE2的代謝沒有顯著影響。
【學位單位】：貴州大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2018
【中圖分類】：R99;X592
【部分圖文】：

腸，皮膚，肺，腎，睪丸和腦。其中，肝臟是 P450 介圖 1.1 可見 CYP 酶可通過其催化循環(huán)增加 ROS 并改變氧化疾病發(fā)展。大量研究表明 PBDESs 經(jīng)細胞色素 P450(Cyp45OH-OBDEs。含有豐富的代謝酶如細胞色素 P450s 的初級肝 OH-PBDEs 代謝的受體。是在 C—H 鍵中插入氧，相當于烷烴底物的羥基化。功能完色素 P450 及其氧化還原載體(包括鐵硫蛋白和黃素蛋白)組中大致存在 9 個不同步驟，順序依次進行。首先，底物與 還原酶(POR)還原一個電子，與氧結(jié)合；其次通過 POR 進行氣與 Fe 平衡，生成(RH)Fe3+(O2-)(化合物 I)，失去 H 原子后最后釋放產(chǎn)物參與下一個代謝過程(Mak et al., 2017; Vei., 2016; Groves et al., 2005; 李建華, 2014 )。CYP450s 酶系催

圖 2.1 OH-PBDEs 的結(jié)構(gòu)圖Fig. 2.1 Concentrations of OH-PBDEs材料與材料 基 -2,2',4,4',5- 五 溴 聯(lián) 苯 醚 (5'-OH-BDE-99) 、 6’- 羥 基 -2,2',4,4',5- 五E-99)、6-羥基-2,2',3,4,4'-五溴聯(lián)苯醚(6-OH-BDE-99)、6-羥基-2,2',3,4,4',BDE-137)購于百靈威科技有限公司(J&K 公司)。三(羥甲基)氨基甲烷(Tr鈉鹽二水合物(Na2EDTA)、二硫蘇糖醇(DTT)、牛血清蛋白(BSA)、考馬斯鹵靈、試鹵靈、甘氨酸、7-乙氧基香豆素、7-羥基香豆素、鹽酸苯胺司)；煙酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)(Sigma Aldrich 公司)；甲醇國 Merck 公司)；氨水(色譜純)、二甲基亞楓(DMSO，藥檢專用)、氯化)均購于國藥集團藥業(yè)股份有限公司。

圖 2.3 OH-PBDEs 的回收率Fig. 2.3 Recoveries of OH-PBDEs.2 OH-PBDEs 在小鼠 S9 中的體外代謝S9 的添加量對 OH-PBDEs 代謝率的影響根據(jù)圖 2.4 結(jié)果顯示，當 S9 添加量在 5~50 μL 范圍內(nèi)，OH-PBDEs 的代謝率隨著 而逐漸升高， 且各目標物的代謝率存在顯著性差異(p＜0.05)，達到 50 μL 時代謝大值；而后當 S9 的添加量再次增加時，OH-PBDEs 的代謝率會逐漸降低，但不存差異(p 0.05)5’-OH-BDE-99 在 S9 的添加量分別為 5、 10、 20 μL 間代謝率不存差異(p 0.05)，達到 40 μL 和 50 μL 時代謝率顯著升高，且當 S9 添加量達到 80 μ率顯著降低； 6’-OH-BDE-99 在 S9 添加量分別為 50、60、80 μL 間代謝率不存在異(p 0.05)； 6-OH-BDE-99 在 S9 添加量分別為 5~50 μL 間代謝率存在顯著性差.05), 達到 50 μL 后代謝率有所降低；6-OH-BDE-137 在 S9 添加量分別為 40、50、6存在顯著性差異(p 0.05)，當 S9 添加量達到 80 μL 后代謝率有所降低�？紤]到 S

【參考文獻】

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本文編號：2813860