本文選題：白鰱　切入點(diǎn)：微囊藻毒素　出處：《河南師范大學(xué)》2015年碩士論文　論文類(lèi)型：學(xué)位論文

【摘要】：絲裂原活化蛋白激酶(MAPKs)是細(xì)胞內(nèi)重要的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)分子,參與生物體多種生理和病理過(guò)程的調(diào)節(jié)。p38 MAPK是MAPK通路的重要成員之一,它可被細(xì)胞內(nèi)生長(zhǎng)因子、細(xì)胞因子和胞外多種刺激(環(huán)境壓力、紫外線、放射線、熱休克、炎癥因子、特定抗原等)所活化,并參與細(xì)胞內(nèi)多種信號(hào)傳遞過(guò)程。原癌基因c-fos、c-jun、c-myc屬即刻早期基因(Immediately Early Genes,IEGs)成員。目前已發(fā)現(xiàn)的IEGs有十幾種,其中c-fos、c-jun基因被廣泛用作外界刺激后神經(jīng)元活化的標(biāo)記,在細(xì)胞活動(dòng)中起著重要的調(diào)控作用。本研究首次克隆了白鰱肝臟p38 MAPK、c-fos和c-jun基因cDNA全長(zhǎng)并進(jìn)行了序列分析,同時(shí)檢測(cè)了微囊藻毒素(Microcystins,MC)對(duì)白鰱的急性毒性作用及其腹腔注射染毒后白鰱肝臟和腎臟p38 MAPK、c-fos、c-jun和c-myc的表達(dá)分析。本研究利用RT-PCR和RACE技術(shù)擴(kuò)增得到p38 MAPK、c-fos、c-jun基因的cDNA全序列。序列分析結(jié)果表明,白鰱肝臟p38 MAPK基因序列全長(zhǎng)2 418 bp,開(kāi)放閱讀框1 086 bp,編碼361個(gè)氨基酸;c-fos基因序列全長(zhǎng)為1 719 bp,開(kāi)放閱讀框1 059 bp,編碼352個(gè)氨基酸;c-jun cDNA全長(zhǎng)1 931 bp,開(kāi)放閱讀框927 bp,編碼308個(gè)氨基酸。生物信息學(xué)分析發(fā)現(xiàn),白鰱p38 MAPK蛋白相對(duì)分子質(zhì)量為41.64 kD,理論等電點(diǎn)為5.54,該蛋白是一個(gè)不穩(wěn)定蛋白,具有較強(qiáng)的親水性。c-Fos蛋白相對(duì)分子質(zhì)量為38.242 kD,理論等電點(diǎn)為4.93,該蛋白是一個(gè)不穩(wěn)定蛋白且具有較強(qiáng)的親水性。c-Jun蛋白相對(duì)分子質(zhì)量為33.928 kD,理論等電點(diǎn)為9.08,是一個(gè)不穩(wěn)定蛋白且具有一定的親水性。二級(jí)結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)顯示,p38 MAPK包含45.71%α-螺旋、13.02%的延伸鏈、4.99%的β-折疊和36.29%的無(wú)規(guī)則卷曲;c-Fos包含25.85%的α-螺旋、12.78%的延伸鏈、1.42%的β-折疊和59.94%的無(wú)規(guī)則卷曲;c-Jun包含32.14%的α-螺旋、5.52%的延伸鏈、1.62%的β-折疊和60.71%的無(wú)規(guī)則卷曲。對(duì)其功能結(jié)構(gòu)位點(diǎn)分析發(fā)現(xiàn),p38 MAPK在35~309 aa之間存在一個(gè)保守的絲氨酸/蘇氨酸激酶區(qū);c-Fos和c-Jun分別在108~172 aa和227~291 aa處有一個(gè)典型的亮氨酸拉鏈結(jié)構(gòu)。通過(guò)構(gòu)建氨基酸系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)顯示,白鰱p38 MAPK與鯉魚(yú)同源性高達(dá)96%,白鰱c-Fos與草魚(yú)c-Fos同源性高達(dá)97%,白鰱c-Jun與草魚(yú)c-Jun同源性高II達(dá)95%,與哺乳動(dòng)物同源性相對(duì)較低。另外,qPCR檢測(cè)結(jié)果顯示p38 MAPK、c-fos和c-jun在白鰱各個(gè)組織均有表達(dá),其中p38 MAPK表達(dá)量高低依次是肌肉腸脾腎鰓肝心腦;c-fos表達(dá)量高低依次是肝脾腎腸肌肉鰓腦心;c-jun表達(dá)量高低依次是肝腸心腦脾腎肌肉鰓。通過(guò)上下增減劑量法(up and down procedure,UDP)對(duì)白鰱進(jìn)行MC急性毒性實(shí)驗(yàn),結(jié)果顯示,MC對(duì)白鰱48 h LD50為520μg·Kg-1。根據(jù)半致死劑量選取50和200μg·Kg-1濃度組MC腹腔注射暴露白鰱,分別于1、3、8和12 h后取材白鰱肝、腎組織,提取RNA,通過(guò)qPCR檢測(cè)白鰱p38 MAPK、c-fos、c-jun和c-myc基因的表達(dá)變化,結(jié)果表明,MC對(duì)其表達(dá)都有明顯的誘導(dǎo)作用,推測(cè)白鰱p38 MAPK、c-fos、c-jun和c-myc可能與MC肝毒性和腎毒性相關(guān)。本研究發(fā)現(xiàn),MC可激活白鰱肝臟p38 MAPK通路及其下游原癌基因c-fos、c-jun、c-myc,推測(cè)MC誘發(fā)肝炎/肝癌可能通過(guò)該信號(hào)通路介導(dǎo)。該研究結(jié)果為深入研究MC誘發(fā)肝炎、肝癌的分子機(jī)制,尋找MC毒作用新的分子靶點(diǎn)和肝病防治藥物靶點(diǎn)提供理論依據(jù)。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：河南師范大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類(lèi)號(hào)】：S917.4;X52

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前3條

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本文編號(hào)：1646659