隨著現(xiàn)代工農(nóng)業(yè)的飛速發(fā)展,環(huán)境中的重金屬排放量日益增長(zhǎng),重金屬污染物進(jìn)入水體通過參與復(fù)雜的水體生物地球化學(xué)循環(huán),導(dǎo)致海洋植物所面臨的生活環(huán)境日益嚴(yán)峻。潮間帶作為海洋與陸地的交界地帶,有其地理位置上的特殊性,微環(huán)境變化顯著,棲息于潮間帶中潮帶巖礁上或石沼內(nèi)的潮間帶大型海藻因此也面臨著日益加劇的重金屬脅迫的壓力。近年來,蛋白質(zhì)組學(xué)研究日益成熟,成為后基因組時(shí)代的重要研究領(lǐng)域。當(dāng)前利用蛋白質(zhì)組學(xué)對(duì)海洋生物的研究越來越受到學(xué)者們的關(guān)注,2-DE技術(shù)可以對(duì)不同環(huán)境脅迫下樣本進(jìn)行比較研究,確定與處理效應(yīng)相關(guān)的特異性蛋白,全面深刻地了解脅迫對(duì)生物體的各種影響。然而迄今為止,鮮見不同濃度銅離子脅迫下潮間帶大型海藻蛋白表達(dá)特異性變化的系統(tǒng)研究報(bào)道。因此,本文選擇煙臺(tái)沿海2種具代表性的潮間帶大型海藻小珊瑚藻（紅藻）和鼠尾藻（褐藻）作為實(shí)驗(yàn)材料,采用蛋白質(zhì)組學(xué)的方法和技術(shù),分別對(duì)藻類的雙向電泳體系進(jìn)行了系統(tǒng)的優(yōu)化,并對(duì)在重金屬脅迫下小珊瑚藻及鼠尾藻的差異蛋白通過雙向電泳技術(shù)進(jìn)行了系統(tǒng)分析。通過分析Cu²⁺處理下海藻蛋白種類及表達(dá)豐度的變化,解析重金屬Cu²⁺濃度梯... 

【文章來源】：煙臺(tái)大學(xué)山東省

【文章頁(yè)數(shù)】：63 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

海洋中重金屬來源途徑Fig.1Sourcesofheavymetalsintheocean

煙臺(tái)大學(xué)碩士學(xué)位論文14mL+10%AP0.45mL+TEMED18μL，30%單體：29.1gAcr+0.9gBis定容至100ml），厚度為1mm的SDS-PAGE膠上端,進(jìn)行垂直板電泳；電泳完成后，取下凝膠，采用硝酸銀染色法對(duì)凝膠進(jìn)行染色。先固定1h（甲醇250mL+冰乙酸50mL+水200mL），再浸泡30min（無水乙醇150mL+無水乙酸鈉34g+硫代硫酸鈉1.25g+戊二醛2.5mL+水350mL），漂洗3次，每次5min，充分漂洗干凈，銀染30min（硝酸銀0.5g+甲醛0.4mL+水500mL注意遮光，盤倒扣），水洗1次，約30秒，顯色（無水碳酸鈉12.5g+甲醛0.2mL+水至500mL），1%醋酸終止。2.2.8圖像掃描及分析脫色后的凝膠立即放置在ImageScanner掃描儀(GEHealthcare)上進(jìn)行掃描，掃描分辨率設(shè)置為300dpi。掃描圖像采用PDQuestAdvanced8.0.1分析軟件進(jìn)行分析。2.3結(jié)果分析2.3.15種提取方法提取小珊瑚藻藻體總蛋白的電泳圖譜質(zhì)量比較圖25種蛋白提取方法的雙向電泳圖譜Fig.22-DEmapsoffiveproteinsextractionmethodsa、b、c、d、e表示蛋白質(zhì)的提取方法，分別為a:酚抽提法;b:TCA-丙酮沉淀法;c:Trizol提取蛋白法;d:Biozol提取蛋白法;e:飽和硫酸銨沉淀法，下同。本研究對(duì)常用的5種蛋白提取方法的雙向電泳圖譜效果進(jìn)行了橫向比較及質(zhì)量分析。飽和硫酸銨沉淀法提取的小珊瑚藻蛋白質(zhì)雙向電泳極不理想，有片狀蛋白陰影出現(xiàn)，分離非常不徹底，雙向電泳效果極差(圖2e)。Biozol提取蛋白法所得圖譜在酸性區(qū)出現(xiàn)大片空白，幾乎無蛋白點(diǎn)出現(xiàn)，堿性區(qū)也只檢測(cè)到數(shù)目十分有限的蛋白點(diǎn)，蛋白點(diǎn)分離不徹底(圖2d)。Trizol提取蛋白法可分離出標(biāo)志性蛋白斑點(diǎn)，但蛋白

煙臺(tái)大學(xué)碩士學(xué)位論文15點(diǎn)數(shù)較少，在堿性區(qū)有較多橫向條紋，影響蛋白質(zhì)的分布及觀察(圖2c)。TCA-丙酮法所得到的圖譜分離效果較好，pH分布范圍較為合理，較飽和硫酸銨沉淀法、Trizol及Biozol三種方法，酸性區(qū)蛋白質(zhì)點(diǎn)明顯增多且清晰，但仍有較多縱、橫向條紋(圖2b)。酚抽提法圖譜質(zhì)量最高，蛋白純度得到有效提升，在酸性區(qū)及堿性區(qū)聚焦均較好，能檢測(cè)到的蛋白點(diǎn)最多，且形狀規(guī)則，無明顯縱、橫向條紋，達(dá)到理想的分離效果(圖2a)。2.3.25種提取方法所得圖譜蛋白質(zhì)點(diǎn)數(shù)目差異及總蛋白濃度比較圖3不同提取方法的蛋白質(zhì)點(diǎn)數(shù)及濃度比較Fig.3Comparisonofproteinnumbersandproteinconcentrationswithdifferentextractionmethodsa:酚抽提法;b:TCA-丙酮沉淀法;c:Trizol提取蛋白法;d:Biozol提取蛋白法;e:飽和硫酸銨沉淀法5種提取方法所得小珊瑚藻電泳圖譜蛋白質(zhì)點(diǎn)數(shù)目見圖3A。由圖可知，飽和硫酸

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本文編號(hào)：3253130