近年來,化石能源燃燒、森林砍伐等工農(nóng)業(yè)活動(dòng)向大氣中排放了大量的CO₂,由此產(chǎn)生的溫室效應(yīng)導(dǎo)致了表層海水溫度的持續(xù)升高;同時(shí),海洋吸收了約1/3人類活動(dòng)排放的CO₂,也導(dǎo)致了海水p H值的持續(xù)降低,這種現(xiàn)象被稱為海洋酸化,其被認(rèn)為是繼“溫室效應(yīng)”之后由CO₂過量排放而引起的又一全球性環(huán)境問題。此外,人類活動(dòng)還向海洋中排放了大量的污染物,主要包括營養(yǎng)鹽類、重金屬、石油及石油類產(chǎn)品、抗生素、持久類有機(jī)污染物和塑料制品等,導(dǎo)致了近海環(huán)境的嚴(yán)重破壞,從而對海洋生物的生存和繁衍以及海洋生態(tài)系統(tǒng)的結(jié)構(gòu)和功能構(gòu)成了嚴(yán)重威脅。我國南海海域擁有豐富的珊瑚礁資源,具有重要的生態(tài)服務(wù)價(jià)值及經(jīng)濟(jì)價(jià)值;目前,我國的南海珊瑚礁生態(tài)系統(tǒng)正遭受著氣候變化和人類活動(dòng)雙重因素的威脅,西沙群島珊瑚礁生態(tài)系統(tǒng)中的活珊瑚比例已不足10%。大馬蹄螺（Trochus niloticus）作為南海珊瑚礁生態(tài)系統(tǒng)中重要的植食性腹足類動(dòng)物,其對大型底棲藻類的啃食作用可有效控制珊瑚礁生態(tài)系統(tǒng)中藻類的生物量,從而保證珊瑚在與藻類的生態(tài)位競爭中處于優(yōu)勢地位。本研究旨在評估南海珊瑚... 

【文章來源】：中國科學(xué)院大學(xué)(中國科學(xué)院煙臺海岸帶研究所)山東省

【文章頁數(shù)】：75 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

技術(shù)路線

第2章大馬蹄螺對海水酸化和熱應(yīng)激復(fù)合暴露的生理響應(yīng)13圖2.1大馬蹄螺血淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)的FITC直方圖注：A-陰性對照組；B-處理組Figure2.1FITCcountshistogramplotyieldedbyflowcytometricanalysisofthetotalhaemocytescountsinT.niloticusNote：A-Negativecontrol;B-Treatment.2.2.4.4血淋巴細(xì)胞呼吸爆發(fā)使用血淋巴細(xì)胞內(nèi)的ROS產(chǎn)量來表示細(xì)胞內(nèi)的呼吸爆發(fā)作用。DCFH-DA可以自由進(jìn)入細(xì)胞，并且在細(xì)胞內(nèi)經(jīng)過酯酶水解轉(zhuǎn)變?yōu)椴粠晒獾腄CFH，DCFH可以被細(xì)胞內(nèi)ROS氧化成為帶有綠色熒光的物質(zhì)DCF，其熒光強(qiáng)度可由流式細(xì)胞儀的FL1通道（綠色熒光）檢測，測定方法簡述如下：取500μLPBS緩沖液重懸的血淋巴細(xì)胞，加入5μLDCFH-DA母液使其在工作液中的最終濃度為0.01mmol/L，18℃避光孵育1小時(shí)后上流式細(xì)胞儀檢測。根據(jù)未加入探針的陰性處理樣品結(jié)果，確定綠色熒光強(qiáng)度的陽性范圍，統(tǒng)計(jì)各樣品陽性范圍中的細(xì)胞內(nèi)DCF綠色熒光強(qiáng)度的幾何平均值，即為細(xì)胞內(nèi)ROS含量（圖2.2）。

大馬蹄螺（Trochusniloticus）對海水酸化和熱應(yīng)激/磺胺甲惡唑復(fù)合暴露的生理響應(yīng)14圖2.2大馬蹄螺血淋巴細(xì)胞呼吸爆發(fā)的FITC直方圖注：A-陰性對照組；B-處理組。Figure2.2FITCcountshistogramplotyieldedbyflowcytometricanalysisyieldedbyflowcytometricanalysisofROSproductioninT.niloticusNote：A-Negativecontrol;B-Treatment.2.2.4.5血淋巴細(xì)胞凋亡率使用AnnexinV-FITC/PI細(xì)胞凋亡試劑盒（碧云天），測定血淋巴細(xì)胞凋亡率。Annexin是一類廣泛分布于真核細(xì)胞細(xì)胞漿內(nèi)的鈣離子依賴的磷脂結(jié)合蛋白，其參與細(xì)胞內(nèi)的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)，可以選擇性的結(jié)合細(xì)胞膜內(nèi)側(cè)的磷脂酰絲氨酸，而在細(xì)胞凋亡早期，各類細(xì)胞均會(huì)將磷脂酰絲氨酸翻到外側(cè)。使用綠色熒光的熒光探針FITC標(biāo)記的Annexin可識別這一重要特征；此外，碘化丙啶（PI）可以對壞死或細(xì)胞膜完整性受到破壞的細(xì)胞進(jìn)行染色，即可區(qū)分樣品中處于凋亡早期狀態(tài)的細(xì)胞和壞死的細(xì)胞，具體測定方法簡述如下：使用500μL緩沖液重懸血淋巴細(xì)胞，加入5μLAnnexinV-FITC和10μLPI染料，18℃下避光孵育20分鐘后使用流式細(xì)胞儀檢測，使用FL-1通道（綠色熒光）檢測AnnexinV-FITC，F(xiàn)L-2通道（紅色熒光）檢測PI。在實(shí)驗(yàn)過程中，設(shè)置未添加染料的陰性對照組、僅加入FITC和PI的單染組以確定散點(diǎn)圖中十字門位置（圖2.3）。各樣品中的血淋巴細(xì)胞凋亡率結(jié)果采用FITC陽性和PI陰性（Q3）細(xì)胞數(shù)目占總細(xì)胞數(shù)目的百分比來表示。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]珊瑚礁生態(tài)系統(tǒng)修復(fù)研究進(jìn)展[J]. 龍麗娟,楊芳芳,韋章良.  熱帶海洋學(xué)報(bào). 2019(06)
[2]山東省主要河流中抗生素污染組成及空間分布特征[J]. 張慧,郭文建,朱晨,李紅莉,王桂勛,岳太星,丁波濤.  中國環(huán)境監(jiān)測. 2019(01)
[3]磺胺類抗生素對水環(huán)境的污染及生態(tài)毒理效應(yīng)[J]. 李秀文,何益得,張巍,徐會(huì),黃其林,周子凡,許靈均.  環(huán)境科學(xué)與技術(shù). 2018(S1)
[4]大型海藻在珊瑚礁退化過程中的作用[J]. 廖芝衡,余克服,王英輝.  生態(tài)學(xué)報(bào). 2016(21)
[5]海洋暖化對海洋生物的影響[J]. 姚翠鸞,George N.Somero.  科學(xué)通報(bào). 2015(09)
[6]中國主要水域抗生素污染現(xiàn)狀及其生態(tài)環(huán)境效應(yīng)研究進(jìn)展[J]. 章強(qiáng),辛琦,朱靜敏,程金平.  環(huán)境化學(xué). 2014(07)
[7]南海珊瑚礁經(jīng)濟(jì)價(jià)值評估[J]. 王麗榮,余克服,趙煥庭,張喬民.  熱帶地理. 2014(01)
[8]As（Ⅲ）暴露對紫貽貝抗氧化酶活性和脂質(zhì)過氧化的影響[J]. 李巧梅,王清,于倩,吳惠豐,由麗萍,趙建民.  海洋通報(bào). 2013(04)
[9]Effects of ocean acidification on the metabolic rates of three species of bivalve from southern coast of China[J]. 劉文廣,何毛賢.  Chinese Journal of Oceanology and Limnology. 2012(02)
[10]軟體動(dòng)物免疫因子研究進(jìn)展[J]. 許寶紅,劉巧林,鐘蕾.  當(dāng)代水產(chǎn). 2010(09)

碩士論文
[1]海洋酸化及變暖對刺參主要生理生態(tài)過程和免疫的影響[D]. 盧羽潔.大連海洋大學(xué) 2017



本文編號：3222886