【摘要】：AN02是本實(shí)驗(yàn)室從土壤中分離得到的一株有較強(qiáng)溶藻活性的放線菌。將其發(fā)酵制備所得的溶藻微生物制劑已成功應(yīng)用于滇池藍(lán)藻控藻示范工程,本研究以該制劑為研究對(duì)象,并嘗試了對(duì)其溶藻物質(zhì)進(jìn)行純化與鑒定。分別用甲醇、乙醇、氯仿、乙酸乙酯、苯胺對(duì)其進(jìn)行系列萃取實(shí)驗(yàn),發(fā)現(xiàn)該活性物質(zhì)易溶于水,能溶于甲醇和苯胺,微溶于乙醇,不溶于乙酸乙酯和氯仿,說(shuō)明此物質(zhì)親水性強(qiáng),極性與甲醇相近。將粗分離得到的樣品用高效液相色譜進(jìn)行分離,對(duì)液相條件進(jìn)行探索,對(duì)餾分分段收集并進(jìn)行溶藻活性測(cè)試。最后確定使用AgilentXDB-C18柱,流動(dòng)相甲醇：水=15：85。液相色譜的紫外檢測(cè)波長(zhǎng)220nm,流速設(shè)置為0.4ml/min。每分鐘收集一次,收集10分鐘。餾分用氮吹儀吹干后分別加入藻液進(jìn)行溶藻活性測(cè)試。在此條件下得出,6-7分鐘餾分有明顯的溶藻活性。將6-7分鐘餾分用高效液相色譜進(jìn)一步分離,使用Hisep C18-T2柱,在流動(dòng)相水：乙腈=90：10,流速0.4ml/min,柱溫為室溫,檢測(cè)波長(zhǎng)為231nm的條件下,得到一個(gè)尖銳的單峰,收集單峰進(jìn)行溶藻活性測(cè)試,發(fā)現(xiàn)有很強(qiáng)的溶藻活性,隨后進(jìn)行了液質(zhì)聯(lián)用檢測(cè)和核磁共振氫譜檢測(cè),結(jié)果發(fā)現(xiàn)送檢樣品為混合物,其中包括了一個(gè)分子量為103～105的物質(zhì)(片段)。用半制備液相色譜分離AN02粉劑樣品,使用global chromatography C18柱,在流動(dòng)相甲醇：水=15：85,流速.1mL/min,柱溫20℃,檢測(cè)波長(zhǎng)220nm的條件下,初期每隔1分鐘收集一次,從第4分鐘開(kāi)始第26分鐘結(jié)束,其中14-16分鐘有明顯溶藻活性后,縮短收集時(shí)間至每隔20秒收集一次,溶藻活性實(shí)驗(yàn)證明每瓶餾分都有溶藻活性且效果差不多,用分析型液相分析了6段餾分發(fā)現(xiàn)其組成成分差異不大,選擇其中兩個(gè)時(shí)段的餾分進(jìn)行氣質(zhì)聯(lián)用檢測(cè),推測(cè)兩個(gè)時(shí)段的餾分均含有的分子量為102的物質(zhì)(即液質(zhì)中103-105的物質(zhì))為溶藻活性物質(zhì)。大量收集單峰餾分對(duì)十種常見(jiàn)藻進(jìn)行溶藻實(shí)驗(yàn),并測(cè)定其EC50。結(jié)果顯示,活性物質(zhì)對(duì)銅綠微囊藻和錐狀斯克里普藻溶藻活性最高,赤潮異彎藻、東海原甲藻次之,其余依次為牟氏角毛藻、集胞藻、微小原甲藻和織線藻,而對(duì)柵藻和普通小球藻均無(wú)溶藻效果。
【學(xué)位授予單位】：華中師范大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號(hào)】：X55;X172

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本文編號(hào)：2745297