基于微流控芯片技術篩選尿嘧啶核苷營養(yǎng)缺陷型米曲霉誘變菌株
發(fā)布時間：2021-07-24 19:28
米曲霉作為中國傳統釀造的重要菌株之一,生長快速且蛋白外分泌能力強,所以常用作外源蛋白表達的優(yōu)良宿主菌。而作為宿主菌的一個篩選標記來說,營養(yǎng)缺陷型標記基因更加高效和安全。而微流控技術可以快速產生一定尺寸和大小均一的液滴,可以很好地應用于細胞分析方面。大大減少了試劑的消耗和提高了篩選速度,我們利用微流控系統對pyrG缺陷株進行篩選,主要研究內容如下:我們搭建了微流控系統平臺,選擇流動聚焦型芯片產生液滴。研究不同的非離子表面活性劑對液滴穩(wěn)定性的影響。用顯微鏡觀察液滴粒徑隨時間的變化,通過液滴的液滴個數、歸一化平均粒徑、液滴粒徑標準差、液滴粒徑歸一化標準差隨時間的變化情況來判斷液滴的穩(wěn)定。當HLB值約為5.5時,表面活性劑體積分數為5%,液滴的穩(wěn)定性在短時間較好。長時間相比,我們選擇了 Abil EM90組成的油相能使液滴在10 h內保持穩(wěn)定,所以選用Abil EM90作為非離子表面活性劑。接著研究油水兩相流量（Q）比對液滴粒徑和分布關系。當Q油/Q水比例越大時,液滴在流道中的間距越來越大,并且液滴從無間隔排列直到呈現了一條直線狀分布。,隨著Q油/Q水的增大,液滴粒徑越來越小。當固定Q油/Q水...
【文章來源】：南昌大學江西省 211工程院校
【文章頁數】：68 頁
【學位級別】：碩士
【部分圖文】：
圖２．２注射泵生成液滴系統實物圖??Ｆｉｇｕｒｅ?２．２?Ｔｈｅ?ｐｈｙｓｉｃａｌ?ｍａｐ?ｏｆ?ｔｈｅ?ｄｒｏｐｌｅｔ?ｓｙｓｔｅｍ?ｇｅｎｅｒａｔｅｄ?ｂｙ?ｔｈｅ?ｓｙｒｉｎｇｅ?ｐｕｍｐ??
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?第二章液滴微流控體系的建立???滴均一性良好。??ａｊ??Ｉ．??０．０?■?？?Ｉ?１?Ｉ?１??１?■?｜?？?１??５０?６０?７０?ＳＯ?９０?１００?１１０?１２０?１３０??ｂａｒ＝２００ｐｍ?粒徑（Ｍｒａ）??Ａ?Ｂ??圖２．４液滴圖像和液滴粒徑概率分布圖（ｌ〇ｘｌ〇）??Ｆｉｇｕｒｅ?２．４?Ｄｒｏｐｌｅｔ?ｉｍａｇｅ?ａｎｄ?ｐｒｏｂａｂｉｌｉｔｙ?ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ?ｏｆ?ｄｒｏｐｌｅｔ?ｓｉｚｅ?（ｌ〇ｘｌ〇）??圖２．４?Ａ為液滴圖片，Ｂ為液滴粒徑概率分布圖。??不同的流量產生液滴在芯片流道中的分布情況如圖２．５所示。從圖２．ＳＡ－Ｄ??來看，四種流量下液滴在流道中的分布無較大波動。在同一條件下，產生的液滴??粒徑大小基本一樣，并且，四種流量下的液滴之間的間距基本一致，無融合現象，??說明該系統生成的液滴具有很好的均一性和穩(wěn)定性。綜上，從而說明該微流控系??統在液滴生成中穩(wěn)定性較好。??１４??
【參考文獻】：
期刊論文
[1]以吡啶硫胺素抗性基因為選擇標記的紅曲菌原生質體轉化研究[J]. 崔華,李燕萍. 安徽農業(yè)科學. 2012(23)
[2]基于基因組改組的米曲霉滬釀3.042多親株PEG介導融合育種[J]. 潘力,梁燕嫦,苗小康,胡杰. 中國釀造. 2008(23)
[3]米曲霉孢子原生質體復合誘變及高活力蛋白酶菌株選育[J]. 胡杰,潘力,羅立新,王斌,盧錦桃. 食品工業(yè)科技. 2007(05)
[4]復合涂層的不粘和耐磨性能研究[J]. 賀敬宏,耿剛強. 西安科技大學學報. 2005(03)
[5]聚四氟乙烯用作耐高壓潤滑材料[J]. 塑料工業(yè). 1974(01)
博士論文
[1]橙色紅曲菌中基于pyrG標記的同源轉化系統的建立[D]. 王伯華.南昌大學 2010
碩士論文
[1]乙烯-四氟乙烯共聚物微孔膜制備及性能研究[D]. 黃衡.天津工業(yè)大學 2019
[2]液滴微流控用于單細胞包裹和數字化PCR[D]. 李越.中國科學技術大學 2016
[3]低能法制備油包水納米乳液及其性能研究[D]. 潘紅.山東大學 2014
[4]高產酸性蛋白酶的醬油發(fā)酵米曲霉的選育[D]. 司曉光.天津科技大學 2014
[5]醬油工業(yè)菌株米曲霉3.951自克隆系統的構建[D]. 季艷偉.南昌大學 2012
[6]微流體系統中的玻璃微管道工藝及其流動特性研究[D]. 黃孫峰.南京理工大學 2004
本文編號：3301283
【文章來源】：南昌大學江西省 211工程院校
【文章頁數】：68 頁
【學位級別】：碩士
【部分圖文】：
圖２．２注射泵生成液滴系統實物圖??Ｆｉｇｕｒｅ?２．２?Ｔｈｅ?ｐｈｙｓｉｃａｌ?ｍａｐ?ｏｆ?ｔｈｅ?ｄｒｏｐｌｅｔ?ｓｙｓｔｅｍ?ｇｅｎｅｒａｔｅｄ?ｂｙ?ｔｈｅ?ｓｙｒｉｎｇｅ?ｐｕｍｐ??
?第二章液滴微流控體系的建立???２．３．２流動聚焦型芯片結構??（３）??Ａ?Ｂ??圖２．３芯片實物圖和結構圖??Ｆｉｇｕｒｅ?２．３?Ｃｈｉｐ?ｐｈｙｓｉｃａｌ?ｄｉａｇｒａｍ?ａｎｄ?ｓｔｍｃｔｕｒｅ?ｄｉａｇｒａｍ??圖２．３八為卩０１＼４８芯片實物圖，８為卩０１＾５芯片結構圖（１）為芯片出口，（２）為水相??進口，Ｃ３）為油相進口。??我們使用的芯片流道深度為１〇〇?（？〇？，主流道寬度均為３００?ｐｍ，油相和水相??交界處的寬度比主流道更小，力丨〇〇?Ｒｍ。在單細胞包埋時，更加有利于細胞依??次通過流道，更容易的生成單細胞分散液滴。芯片附著在玻璃上，材質為ＰＤＭＳ，??是一種表面疏水的材料，適合形成油包水液滴。??２．３．３系統穩(wěn)定性檢測??如圖２．４所示，該微流控系統生成的液滴圖像和液滴粒徑概率分布圖。配制??邛如８０?２．２２§和吐溫８０?０．２８§作為油相，設置程序〇油＝０．２２?１１１１７１１，〇水＝０．０２６??ｍＬ／ｈ。從２．４?Ａ看，生成的液滴均一性較好。從液滴粒徑概率分布圖（圖２．４?Ｂ）??來看，液滴的平均粒徑為９６．６９叫，生成的液滴直徑集中在９〇叫１－１００叫１，粒??徑分布范圍在８５?＾１１１－１０５?（ｉｍ。液滴粒社的波動范圍較小，因此該系統生成的液??１３??
?第二章液滴微流控體系的建立???滴均一性良好。??ａｊ??Ｉ．??０．０?■?？?Ｉ?１?Ｉ?１??１?■?｜?？?１??５０?６０?７０?ＳＯ?９０?１００?１１０?１２０?１３０??ｂａｒ＝２００ｐｍ?粒徑（Ｍｒａ）??Ａ?Ｂ??圖２．４液滴圖像和液滴粒徑概率分布圖（ｌ〇ｘｌ〇）??Ｆｉｇｕｒｅ?２．４?Ｄｒｏｐｌｅｔ?ｉｍａｇｅ?ａｎｄ?ｐｒｏｂａｂｉｌｉｔｙ?ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ?ｏｆ?ｄｒｏｐｌｅｔ?ｓｉｚｅ?（ｌ〇ｘｌ〇）??圖２．４?Ａ為液滴圖片，Ｂ為液滴粒徑概率分布圖。??不同的流量產生液滴在芯片流道中的分布情況如圖２．５所示。從圖２．ＳＡ－Ｄ??來看，四種流量下液滴在流道中的分布無較大波動。在同一條件下，產生的液滴??粒徑大小基本一樣，并且，四種流量下的液滴之間的間距基本一致，無融合現象，??說明該系統生成的液滴具有很好的均一性和穩(wěn)定性。綜上，從而說明該微流控系??統在液滴生成中穩(wěn)定性較好。??１４??
【參考文獻】：
期刊論文
[1]以吡啶硫胺素抗性基因為選擇標記的紅曲菌原生質體轉化研究[J]. 崔華,李燕萍. 安徽農業(yè)科學. 2012(23)
[2]基于基因組改組的米曲霉滬釀3.042多親株PEG介導融合育種[J]. 潘力,梁燕嫦,苗小康,胡杰. 中國釀造. 2008(23)
[3]米曲霉孢子原生質體復合誘變及高活力蛋白酶菌株選育[J]. 胡杰,潘力,羅立新,王斌,盧錦桃. 食品工業(yè)科技. 2007(05)
[4]復合涂層的不粘和耐磨性能研究[J]. 賀敬宏,耿剛強. 西安科技大學學報. 2005(03)
[5]聚四氟乙烯用作耐高壓潤滑材料[J]. 塑料工業(yè). 1974(01)
博士論文
[1]橙色紅曲菌中基于pyrG標記的同源轉化系統的建立[D]. 王伯華.南昌大學 2010
碩士論文
[1]乙烯-四氟乙烯共聚物微孔膜制備及性能研究[D]. 黃衡.天津工業(yè)大學 2019
[2]液滴微流控用于單細胞包裹和數字化PCR[D]. 李越.中國科學技術大學 2016
[3]低能法制備油包水納米乳液及其性能研究[D]. 潘紅.山東大學 2014
[4]高產酸性蛋白酶的醬油發(fā)酵米曲霉的選育[D]. 司曉光.天津科技大學 2014
[5]醬油工業(yè)菌株米曲霉3.951自克隆系統的構建[D]. 季艷偉.南昌大學 2012
[6]微流體系統中的玻璃微管道工藝及其流動特性研究[D]. 黃孫峰.南京理工大學 2004
本文編號：3301283
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