本文關鍵詞：熒光能量共振轉移法研究牛血清蛋白部分肽段和水相金納米顆粒的相互作用

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【摘要】：最新研究發(fā)現(xiàn)牛血清白蛋白(Bovine Serum Albumin, BSA)可以被兩親性聚合物(Amphiphilic Polymer, AP)包裹的金納米顆粒即水相金納米顆粒(Aqueous Phase Gold Nanoparticles, AP-AuNPs)高親和吸附,依次經蛋白酶K酶解、十二烷基硫酸鈉(Sodium Dodecyl Sulfate, SDS)洗脫、聚丙烯酰胺凝膠純化回收、質譜鑒定得知,吸附區(qū)域為BSA中的三段肽鏈LGEYGFQNALIVRY、 KDAFLGSFLYEYSR和KVPQVSTPTLVEVSRS.為了進一步研究BSA與AP-AuNPs的作用機理,本研究選取了上述肽段中含有熒光氨基酸殘基的兩段,LGEYGFQNALIVRY (P1)和KDAFLGSFLYEYSR (P2),以及BSA中距離吸附區(qū)最遠的且含有熒光氨基酸殘基的一段肽鏈FDEHVKLVNELTEF (P3),先經過體外固相合成這三段肽鏈,然后分別與AP-AuNPs吸附,利用最大吸光光譜紅移法和瓊脂糖鑒定法對二者的相互作用進行定性研究,再利用熒光能量共振轉移(Fluorescence Resonance Energy Transfer, FRET)法和熱力學方程分別計算出AP-AuNPs與三段肽鏈之間的結合常數(shù)和吉布斯自由能。通過比較結合常數(shù)和吉布斯自由能的大小發(fā)現(xiàn),AP-AuNPs可吸附P1和P2,而不吸附P3或吸附力極小。進而得知,BSA與AP-AuNPs吸附區(qū)域的特異性,AP-AuNPs會選擇性吸附BSA的部分肽段,與肽鏈的序列信息有關,具有一定的識別能力。這一結果使我們對BSA和AP-AuNPs的作用機制有了更深層次的理解,這對于納米顆粒對蛋白質的生物標記、重金屬污染檢測以及具有識別能力的多肽鏈的開發(fā)等熱門課題的研究具有重要的指導意義。
【關鍵詞】：金納米顆粒 多肽 熒光能量共振轉移 特異性結合
【學位授予單位】：內蒙古農業(yè)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：Q51;TB383.1
【目錄】：

• 摘要3-4
• abstract4-9
• 1 引言9-14
• 1.1 概述9-10
• 1.2 國內外研究現(xiàn)狀10-11
• 1.3 研究背景和意義11-12
• 1.4 研究內容12-13
• 1.5 創(chuàng)新點13-14
• 2 實驗材料與方法14-21
• 2.1 試劑14
• 2.2 實驗儀器14
• 2.3 實驗方法14-21
• 2.3.1 油相金納米顆粒的合成14-15
• 2.3.2 兩親性聚合物的制備15
• 2.3.3 油相金納米顆粒的包裹15-16
• 2.3.4 水相金納米顆粒的純化16
• 2.3.5 固相法合成多肽16-17
• 2.3.6 多肽的純化17
• 2.3.7 多肽的凍干17
• 2.3.8 溶液的配制17
• 2.3.9 多肽與金納米顆粒作用機制的研究17-21
• 3 實驗結果及分析21-32
• 3.1 水相金納米顆粒的表征21
• 3.2 多肽和水相金納米顆粒的表征21-22
• 3.3 水相金納米顆粒與牛血清蛋白吸附的梯度試驗22-23
• 3.4 水相金納米顆粒與多肽的熒光淬滅試驗23-30
• 3.4.1 多肽P_1與水相金納米顆粒的相互作用24-26
• 3.4.2 多肽P_2與水相金納米顆粒的相互作用26-28
• 3.4.3 多肽P_3與水相金納米顆粒的相互作用28-30
• 3.5 水相金納米顆粒與多肽的熒光能量共振轉移結果30-32
• 4 結論32-33
• 5 展望33-34
• 致謝34-35
• 參考文獻35-38
• 附錄38-39
• 作者簡介39

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