隨著納米技術(shù)的迅速發(fā)展,納米材料的生物安全性能也成為了人們關(guān)注的重點(diǎn)。人們?cè)谏瞽h(huán)境中,不可避免地會(huì)接觸各種納米材料,納米材料由于粒徑處于宏觀粒子與原子簇的過(guò)度區(qū)域,具有獨(dú)特的理化性質(zhì)及生物動(dòng)力學(xué)行為,對(duì)人體存在著潛在的威害。因此對(duì)納米材料與生物體之間相互作用的研究格外重要。本文通過(guò)暗場(chǎng)顯微成像技術(shù)實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)細(xì)胞對(duì)于金納米粒子的胞吞及胞吐作用,并構(gòu)建暗場(chǎng)成像自動(dòng)化識(shí)別計(jì)數(shù)系統(tǒng)對(duì)細(xì)胞內(nèi)金納米粒子進(jìn)行定量分析。同時(shí)通過(guò)對(duì)金納米粒子的功能化修飾研究細(xì)胞內(nèi)金納米材料的聚集狀態(tài)對(duì)細(xì)胞外排及細(xì)胞毒性的影響,得出以下主要結(jié)論:（1）通過(guò)采集到的暗場(chǎng)圖片顯示,納米材料的表面修飾影響細(xì)胞的內(nèi)吞,且細(xì)胞內(nèi)呈現(xiàn)出大量聚集的金納米粒子不易被外排至細(xì)胞外。（2）根據(jù)圖像的特征,成功構(gòu)建暗場(chǎng)成像自動(dòng)化識(shí)別計(jì)數(shù)系統(tǒng)。此算法設(shè)定分為四個(gè)部分,包括色彩空間的轉(zhuǎn)換、亮度閥值的設(shè)定、圖像的分割以及色彩的分析。并用此系統(tǒng)對(duì)細(xì)胞內(nèi)吞、外排金納米粒子進(jìn)行了定量分析。同時(shí)通過(guò)ICP-MS對(duì)細(xì)胞內(nèi)吞、外排金納米粒子進(jìn)行定量檢測(cè)。兩種方法的檢測(cè)結(jié)果呈現(xiàn)出高度一致。（3）對(duì)兩種不同聚集狀態(tài)的金納米粒子進(jìn)行了細(xì)胞活力、細(xì)胞凋亡以及ROS水平... 

【文章來(lái)源】：沈陽(yáng)農(nóng)業(yè)大學(xué)遼寧省

【文章頁(yè)數(shù)】：58 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

局部表面等離子體共振示意圖

181.5.暗場(chǎng)顯微技術(shù)當(dāng)金納米材料的尺寸在納米量級(jí)時(shí)，常規(guī)的觀測(cè)方法不易被觀測(cè)到，在光照條件下，金納米粒子的局部表面等離子共振效應(yīng)，發(fā)生強(qiáng)烈的瑞利散射，使其可以在暗場(chǎng)顯微鏡下被觀測(cè)到。暗場(chǎng)顯微鏡又稱暗視野顯微鏡(樊春海等，2018；夏波等，2016；周昕等，2017)，在普通顯微鏡下直射光透過(guò)標(biāo)本的時(shí)候，一部分光被吸收；另一部分光透射或折射，形成標(biāo)本內(nèi)部結(jié)構(gòu)的真實(shí)投影。因此，在普通顯微鏡下所看到的是物體形態(tài)和結(jié)構(gòu)。暗場(chǎng)顯微鏡是利用斜射照明法阻擋透過(guò)標(biāo)本細(xì)節(jié)的直射光，以反射光和衍射光來(lái)觀察樣本，如圖1-2所示，在暗場(chǎng)顯微鏡下從側(cè)面照射到物體的光束，繞射或反射造成物體外形的側(cè)影(CARENCOS,etal,2016)。因此，暗場(chǎng)顯微鏡下所看到的只是物體的輪廓或物體的運(yùn)動(dòng)。暗場(chǎng)顯微鏡的聚光器和普通顯微鏡鏡是不同的，在暗場(chǎng)顯微鏡中裝有一個(gè)使光線不能直接通過(guò)的中央遮暗的聚光器，光線只能從聚光器四周和沒(méi)有被遮暗的地方斜射到樣本上。光線因斜射而沒(méi)有進(jìn)入物鏡所以視野是暗的，只有標(biāo)本反射和衍射的光線才能進(jìn)入物鏡，所以物體的邊緣是亮的。普通顯微鏡下可以看到450nm的細(xì)節(jié)，而暗場(chǎng)顯微鏡下能看到4-200nm的極微小物體。而且，金納米顆粒的粒徑不同，在暗場(chǎng)顯微鏡下還會(huì)顯現(xiàn)出不同的顏色，在傳感等領(lǐng)域(陳鈺等，2012；李穎等，2012；屠聞文等，2011；楊濤等，2017；云雯等，2013；張釗等，2020,馮兆斌，2013；于曉梅等，2018)中具有巨大前景(ALODHAYBA,etal,2020;BAGGAK,etal,2016;BOGUER,2014;KANGYR,etal,2010)。圖1-2暗場(chǎng)顯微鏡工作原理Fig.1-2Workingprincipleofdarkfieldmicroscope在最近的研究中，通過(guò)設(shè)計(jì)磁珠-金納米粒子雜交探針，利用暗場(chǎng)顯微鏡檢測(cè)T4多核苷酸激酶（T4PNK）的活性，檢測(cè)限低至0.0058U/mL。在另一項(xiàng)

第四章基于暗場(chǎng)顯微成像觀測(cè)納米顆粒的胞吞及胞吐29圖3-1：a).40nm金納米粒子透射電子顯微鏡表征；b.)SH-R36-AuNPs透射電子顯微鏡表征；c.)SH-R36P-AuNPs透射電子顯微鏡表征。Fig.3-1a.)Transmissionelectronmicroscopycharacterizationof40nmgoldnanoparticles;b.)TransmissionelectronmicroscopycharacterizationofSH-R36-AuNPs;c.)TransmissionelectronmicroscopycharacterizationofSH-R36P-AuNPs.a.b.

【參考文獻(xiàn)】：
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碩士論文
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